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《河北农业大学》 2007年
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枣疯病生物防治的初步研究

侯晓杰  
【摘要】: 本试验通过对枣疯病菌、枣树及长春花的低温和超低温保存,婆枣体内植原体的存活动态,枣树内生菌的分离、检测及不同来源的内生菌在枣树体内运转规律及枣疯病植原体拮抗微生物和抗生素的筛选研究,为枣疯病的生物防治奠定了基础,主要研究结果如下: 1枣疯病菌、枣树及长春花的低温和超低温保存 试验分别采用包埋玻璃化法对枣疯病组培苗茎尖及带腋芽茎段、枣树病愈伤组织、健康婆枣组培苗茎尖及带腋芽茎段、长春花组培苗茎尖及茎段,玻璃化法对枣疯病愈伤组织、组培苗带腋芽茎段,简单玻璃化法对枣疯病组培苗、健康婆枣组培苗、长春花组培苗茎尖,一般低温保存方法对长春花栽培苗茎段进行了低温(-20℃、-76℃、-196℃)保存研究。结果表明,只有长春花组培苗茎尖在液氮中保存48h后恢复培养成功,而在其它温度及采用其它方法保存时组织材料均死亡:枣树材料在不同的温度下,采用不同的保存方法在恢复培养时组织全部死亡。 2枣树体内植原体的存活动态 采集越冬期和越冬前后的枣疯病枝条并对越冬期枝条进行水培,通过萌芽的症状观察和PCR检测,发现枣疯病枝条韧皮部和萌芽内均可扩增出1.5Kb的植原体特异性条带,表明枣疯病植原体可以在-10℃左右的地区在枣树地上部枝条内安全越冬:利用PCR技术检测了冬季轻病树的病枝、根部、主干及树冠内未表现症状的枝条韧皮部,结果只在病枝内检测到植原体的存在,而在其它部位都未发现植原体。 3植物内生菌的分离、检测及不同来源的内生菌在枣树体内的运转规律 本文分别从健康婆枣根部和阜平大枣健康果实内分离得到内生链霉菌CN120、CN121。该试验对枣疯病组培苗、四环素处理过的枣疯病组培苗、阜平大枣健康种子组培苗和健康婆枣外植体组培苗4种材料体内的内生菌进行了显微镜观察和16SrDNA的PCR检测。结果显示,各种材料在显微镜1600倍下观察到了不同形态和大小的细菌;分子检测结果出现了亮而清晰的1.5Kb的细菌DNA条带,表明上述组织内均含有内生细菌。在研究不同来源的内生细菌和内生链霉菌在枣树体内定殖和运转的规律时,通过体外接种的试验方法,分别将CN015r、CN017r、CN122 3个菌株接种于健康婆枣组培苗,在接种后7d、15d、30d时利用平板稀释法检测其内生性,结果表明:CN015r、CN017r、CN122都可以进入到枣树组培苗内,同一部位随着时间的增加进入植株体内的内生菌的量有所增加,同一植株在同一时间检测到的内生细菌的量由茎基到茎中呈逐渐减少的趋势,顶部最少。健康婆枣组培苗经四环素处理30d后再接种CN017r,30d后进行内生性检测时,茎基部为2.14×10~9CFU/g,而未处理苗为1.70×10~7CFU/g,表明经四环素处理后的枣组培苗,可培养内生细菌进入其体内的数量明显增加。 4枣疯病植原体拮抗微生物和抗生素的筛选 以已知对植原体有防治效果的四环素和土霉素为对照,利用9种细菌(CN015r、CN017r、CN068、CN078、CHA0r、JM218、WCS358r、WCS358::phl、WCS417r),6种链霉菌(CN120、CN121、龟裂链霉菌、金色链霉菌、武夷菌素链霉菌、玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63)及其代谢产物和6种抗生素[二乙酰间苯三酚(2,4-diacetylphloroglucinol,DAPG)、氯霉素、利福平、硫酸链霉素、酒石酸泰诺菌素和替米考星]对枣疯病植原体进行了拮抗性筛选。枣疯病组培苗经各细菌、链霉菌及其代谢产物和抗生素处理一定时期后观察,龟裂链霉菌菌体处理的枣疯病苗,第15天时观察,组培苗生长正常.症状无缓解;第30天时观察,病苗上部叶片变大,茎节伸长,症状有所缓解;第45天时观察,枣疯病苗大部分叶片恢复正常,症状得到缓解。龟裂链霉菌代谢产物对枣疯病组培苗的症状也具缓解作用。细菌、抗生素和其它链霉菌及其代谢产物都不具有抑制植原体的作用,枣疯病组培苗未恢复正常。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S436.65

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【引证文献】
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【同被引文献】
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