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化学处理和热处理脱除苹果潜隐性病毒的研究

晏娜  
【摘要】: 苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)、苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)、苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)是苹果上3种重要的潜隐性病毒,广泛分布于世界各苹果种植区。这3种病毒通常不表现明显症状,但影响树势,降低产量。栽培无病毒苗木是杜绝这类病毒危害的主要途径,化学处理和变温热处理是获得苹果无病毒种质的重要方法。本研究以22个苹果品种和砧木的继代苗为试材,以RT-PCR技术为检测手段,探讨3种化学药剂处理和热处理对试材的生长状况及脱毒效率的影响,进一步了优化传统的脱毒体系,提高了脱毒效率,主要结果如下: 1在培养基中添加不同浓度的阿昔洛韦、病毒灵和病毒醚3种化学药剂对苹果茎尖进行常温暗培养,处理40d后取2mm茎尖继代培养,40d后利用RT-PCR方法进行病毒检测,结果表明,阿昔洛韦和病毒灵的最佳浓度分别为60mg/L和40mg/L,在此浓度下,苹果茎痘病毒和苹果褪绿叶斑病毒的脱除率均达到100%,而苹果茎沟病毒的脱除率分别为63%和62%。病毒醚的最佳浓度为10mg/L,在此浓度下三种潜隐性病毒的脱除率均达到100%。病毒醚、阿昔洛韦和病毒灵的脱除效率分别为230.5%、169.47%、143.22%。 2 10mg/L病毒醚处理条件下,无论是热处理还是常温培养,在暗培养条件下,三种潜隐性病毒的脱除率均达到100%,显著高于光培养的脱毒率,并且由于增殖系数和茎尖分化率的不同,暗培养的脱毒效率均显著高于光培养;无论是在光培养还是暗培养条件下,热处理的脱除率均显著高于常温培养。 3在暗培养结合热处理的条件下,6-BA和GA3的最佳浓度分别为2.0mg/L和0.3 mg/L,在此浓度下ACLSV和ASPV的脱除率均为100%,ASGV的脱除率均为95%,脱除效率分别提高了273.9%和109.5%; NAA的最适浓度为0.4mg/L,脱毒率为90%,但由于增殖系数的下降,其脱毒效率反而降低了54.2%。 4不同苹果品种和砧木类型组培苗对热处理结合暗培养脱毒反应不尽相同。试验结果表明:不同的苹果品种和砧木耐热性差异明显。其中王林、乔纳金、嘎拉、金冠、珠美海棠、P22的耐热性最强;GM256、弘前、SH系耐热性最差;惠民短枝富士、浓红富士、天红1号、B9、M9、P59、77-34、天红2号、Jazz的耐热性居中。在相同处理下不同的苹果基因型脱除苹果潜隐性病毒的效果存在差异,惠民短枝富士、SH17、M9、弘前、GM256脱毒效率最高;77-34、P59、P22、天红1号次之;乔纳金、SH40、SH38、浓红富士的脱毒率最低。另外在相同的条件下,同一试材不同病毒的脱除率也存有差异,ACLSV最容易脱除,ASGV最难脱除,ASPV居中。 5比较了22个苹果品种和砧木组培苗对10mg/L病毒醚脱毒的反应。结果表明,不同的苹果品种和砧木抗药性差异显著。嘎拉、弘前、珠美海棠、B9、P22、P59、77-34、GM256、M9抗药性最强;SH17、天红2号、天红1号、惠民短枝富士、SH29、SH40、SH38、王林、乔纳金次之;金冠、浓红富士、SH28、Jazz抗药性最差。除天红2号、浓红富士、Jazz、SH38、SH29外,其余品种和砧木三种潜隐性病毒的脱除率均为100%。说明10mg/L病毒醚脱毒处理适合于大多数苹果品种和砧木,该技术具有较为广泛的适用性。 6采用PAS-ELISA与RT-PCR两种方法对同一批试材的苹果茎沟病毒进行检测。结果表明,PAS-ELISA方法检测的脱毒率为85%,而RT-PCR仅为25%,说明RT-PCR检测法的灵敏度远远高于PAS-ELISA,准确度高。


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