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《河北农业大学》 2010年
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五倍子没食子酸的提取、纯化及抑菌效果研究

王广娟  
【摘要】: 本研究针对五倍子中的主要活性成分没食子酸,进行提取、纯化以及稳定性和抑菌效果的研究,目的是寻找高效安全的抗生素的代替品,应用于动物饲料添加剂中,从而可以免除由于抗生素在动物饲料添加剂中的滥用而引起动物和人类健康问题的困扰。 分别采用了乙醇回流、高温回流、酸水解三种不同的方法从五倍子中提取没食子酸,并分别通过单因素和正交试验确定了三种方法的较优提取条件。其中,乙醇回流法的较优提取工艺条件为:提取剂60%乙醇,提取温度76℃,溶液pH值为2,提取时间90 min,料液比为1:10,提取2次;高温回流法的较优提取工艺条件为:电热套加热温度约为400℃,盐酸浓度为0.36 mol/mL,提取时间为7 h,料液比为1:100;酸水解法的较优提取工艺条件为:沸水加热温度为100℃,料液比1:80,提取时间3 h,盐酸浓度为4 mol/mL。三种方法在较优提取条件下没食子酸得率为分别为8.35%、50.9%、56.3%。由此可得,五倍子中没食子酸的较优提取方法为酸水解法。 比较了树脂法、萃取法和树脂-萃取联合纯化法对五倍子没食子酸进行纯化,得出最优纯化方法为树脂-萃取联合纯化法。首先,选择树脂为D301,上样流速为1 mL/min,洗脱速度为1 mL/min,洗脱溶剂为5%盐酸-70%乙醇的条件进行纯化,再将纯化物以乙酸乙酯萃取,萃取温度为室温20℃左右,萃取3次,萃取液体积比1:1,每次萃取时间10 min,最终可得样品纯度为90.0%。 通过对本实验制得的纯化物进行IR、HPLC、UV分析,明确了其结构为没食子酸。 稳定性研究表明,光、热、pH和防腐剂对没食子酸纯化物的稳定性均有显著性影响,其中pH值影响最大,没食子酸纯化物在酸性条件下很稳定,随着pH值的增加稳定性逐渐下降,碱性条件下极不稳定。 针对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌这四种菌,0.09 g/mL五倍子没食子酸纯化物抑菌圈的平均直径分别为4.98、4.25、3.28、3.80 cm,最小抑菌浓度为0.90、9.00、9.00、9.00 mg/mL,其抑菌效果显著高于五倍子粗提物。0.09 g/mL没食子酸纯化物的抑菌效果显著低于0.1 g/mL青霉素,略低于0.008 g/mL庆大霉素,但差异不显著,但是要显著高于0.1 g/mL乙酰螺旋霉素。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R284.2

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【引证文献】
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