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《河北农业大学》 2010年
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TcLr19小麦中NBS类抗病同源基因的克隆及分析

张楠  
【摘要】: 由小麦叶锈菌(Puccinia triticina)引起的小麦叶锈病是世界范围内重要的小麦病害之一,选育并合理利用抗病品种是防治该病最经济、有效和环境安全的方法。Lr19来源于长穗偃麦草(Agropyron elongatum syn.或Thinopyrum elongatum),是目前国内外具有较大应用潜力的抗叶锈病基因。 本研究根据已克隆植物抗病(R)基因NBS保守结构域设计简并引物,采用同源克隆技术(Homology-based cloning),并结合cDNA末端快速扩增技术(Rapid amplification cDNA end,RACE),在小麦抗叶锈病近等基因系材料TcLr19中进行抗病同源基因cDNA全长的扩增。主要研究结果如下: 1.根据抗病基因核苷酸结合位点(Nucleotide binding site,NBS)保守结构域设计简并引物,从携带小麦抗叶锈病基因Lr19的回交6代近等基因系材料TcLr19中获得了2个通读的小麦抗病基因同源片段S11A11和CIN14,它们均含有NB-ARC保守结构域,与已知的抗病基因I2C-1,I2C-2,RPS2,RPM1等相应区域相一致,具有抗病基因NBS特征结构域(激酶2、激酶3a和HD疏水结构域)。 2.以S11A11为靶序列,采用RACE技术在TcLr19中获得了cDNA全长为2923bp小麦抗病相关基因,该基因包含2637bp的开放阅读框,编码878个通读的蛋白质氨基酸序列,161bp的5′非翻译区(non translated region,UTR),100bp的3′非翻译区和25bp的多聚腺苷酸(A)尾。S11A11基因编码产物具有CC、NBS、LRR、HD等保守结构域,符合典型单子叶植物所具有的CC-NBS-LRR结构模式。在GenBank获得的登录号为GU356592。 3.以CIN14为靶序列,采用RACE技术在TcLr19中获得了cDNA全长为2987bp小麦抗病相关基因,该基因包含2643bp的开放阅读框,编码880个通读的蛋白质氨基酸序列,155bp的5′非翻译区,138bp的3′非翻译区和35bp的多聚腺苷酸尾。CIN14基因编码产物具有CC、NBS、LRR、HD等保守结构域,符合典型单子叶植物所具有的CC-NBS-LRR结构模式。在GenBank获得的登录号为GU356591。 4.应用半定量RT-PCR技术对未接菌和接菌不同时间点(0h,6h,12h,18h,24h,36h,48h,60h,72h,96h)的TcLr19进行了分析,结果表明TcLr19在接菌前,以及接菌后96小时内,S11A11、CIN14基因均有表达,而且表达水平基本一致,说明在取样时间范围内,TcLr19不受小麦叶锈菌的诱导,其表达方式为低丰度组成型表达。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S435.121

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 李淑凤;小麦叶锈菌与TcLr19非亲和互作EST分析及TaRLP19、TaSTKC8克隆与表达[D];河北农业大学;2012年
【参考文献】
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