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《河北农业大学》 2010年
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高致病性PRRSV的RT-PCR鉴别诊断方法的建立及应用

赵泽坤  
【摘要】: 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病。根据其基因组序列的差异,可分为欧洲型和美洲型。自1996年我国首次分离到美洲型CH-1a株以来,我国流行的PRRSV毒株均属于美洲型。2006年以后我国开始流行以“高热病”为特征的高致病性猪繁殖与呼吸综合征变异毒株(HP-PRRSV),经基因组序列分析得知,高致病性PRRSV为Nsp2基因序列缺失90bp的变异毒株。为了快速诊断猪繁殖与呼吸综合征并区分两种毒株,建立鉴别诊断方法是十分必要的。 本实验根据GenBank中已发表的序列,经过经典毒株与高致病性毒株的多序列对比,根据PRRSV高致病性变异株和经典株Nsp2基因序列差异,针对Nsp2基因中缺失区域,设计一对包含缺失区在内的特异性鉴别引物。经过RT-PCR扩增,对于经典的PRRSV毒株可扩增出576bp的片段,而对于高致病性毒株则扩增486bp的片段,根据目的片段的不同,通过一次RT-PCR区分PRRSV高致病株和经典株,从而建立一种能快速区分PRRSV高致病株和经典株的特异、敏感、重复性好的RT-PCR鉴别诊断方法。用本方法检测猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)均为阴性,表明此方法特异性好。敏感性试验表明此方法对于高致病性和低致病性PRRSV的最低检测浓度分别为原cDNA浓度的10-5倍(0.02ng/μL)和10-4倍(0.2ng/μL)。对同一样品进行3次重复检测实验,实验结果均完全一致,表明该检测方法具有好的重复性。用本方法对从河北省各地区收集的38份疑似PRRS病料样品进行RT-PCR检测, PRRSV阳性为20份,其中高致病性样品为16份。并通过与其他的RT-PCR诊断方法进行比较试验,结果均一致,说明所建立的检测方法准确性高。 将检测阳性的4份病料,接种Marc-145细胞进行增殖培养,接种细胞后均出现典型的细胞病变(CPE),经鉴定后分别命名为QHD1、TS01、TS002、TS55。通过对4株分离株的部分Nsp2基因进行克隆、序列测定,发现4个分离株的部分Nsp2基因与以往分离的高致病性毒株存在着相同缺失,均在第481位和第532~560位不连续缺失30个氨基酸,表明分离株均是变异毒株。通过与国内外主要流行的PRRSV毒株进行同源性和进化树分析,发现分离株与近些年来高致病性毒株高度同源,这为本地区规模化猪场有效的诊断PRRS提供了科学依据,丰富了PRRS感染的流行病学资料。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S858.28

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 马朝志;肖少波;宁娟;江云波;方六荣;陈焕春;;猪繁殖与呼吸综合征病毒HS株结构蛋白基因的克隆与序列分析[J];动物医学进展;2007年06期
2 赵坤;张慧辉;郭东升;;猪繁殖障碍与呼吸道综合征的初步诊断及组织灭活苗的研制[J];中国畜牧兽医;2005年12期
3 李勇,梅书棋,郑新民,樊俊华,孟庆友,杨宜生;用RT-PCR对湖北省部分猪场猪繁殖与呼吸综合症的检测[J];华中农业大学学报;2000年04期
4 刘丽霞;沈国顺;;猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展[J];现代畜牧兽医;2006年12期
5 赵坤;王三虎;李敬玺;姜金庆;赵恒章;李军民;;猪繁殖与呼吸综合征油乳剂灭活疫苗的研制[J];河南农业大学学报;2006年04期
6 仇华吉,童光志,周彦光,郭宝清,王柳,张绍杰,王玫,刘宝全;猪生殖—呼吸道综合征病毒(PRRSV)E蛋白基因真核表达质粒的构建[J];生物技术;1999年02期
7 卫广森,张佳谊,王南云;猪繁殖与呼吸综合症[J];现代化农业;1994年02期
8 高志强,郭鑫,杨汉春,陈艳红,查振林;猪繁殖与呼吸综合征病毒缺失变异株的基因组特征[J];畜牧兽医学报;2005年06期
9 郭宝清,陈章水,刘文兴,崔益洙;从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究[J];中国畜禽传染病;1996年02期
10 尹训南,郭宝清,司昌德,蔡雪辉,褚桂芳;猪生殖-呼吸道综合征病毒抗原在仔猪体内定位的研究[J];中国畜禽传染病;1997年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 吴丛梅,黄天华,吴德生,谢庆东,徐小虎;pEgr-P16重组质粒的构建及其在EC9706细胞中的辐射诱导表达[J];癌变.畸变.突变;2003年04期
2 阮烨,王晓云,谢庆东,黄天华;外源DNA转染精子的实验研究[J];癌变.畸变.突变;2004年03期
3 欧阳松应,徐寿水,沈文律,周传香,李春艳,欧阳红生;人PTEN基因表达载体的构建及其在U_(251)细胞中的表达[J];癌变.畸变.突变;2004年04期
4 陈传德,吴中亮,陈家堃;乙酸镍诱导的人支气管上皮细胞系转化细胞基因组不稳定性分析[J];癌变.畸变.突变;2005年01期
5 熊小芳,黄天华,谢庆东,王晓梅,陈桂兰;精子携带的HBV DNA在小鼠早期胚胎中的复制与表达[J];癌变.畸变.突变;2005年03期
6 连京华,秦卓明,黄波;鸡传染性支气管炎研究进展[J];山东农业科学;2000年01期
7 钱凤芹,刘长梅,任红梅,李爱芹,庄文忠;鸡新城疫病毒山东分离株F蛋白基因的克隆与鉴定[J];山东农业科学;2001年03期
8 吴家强,颜世敢,胡北侠,任素芳,黄艳艳,张秀美;细胞培养对PRRSV-SD分离株滴度的影响[J];山东农业科学;2002年06期
9 东野传现;史玉颖;黄中利;刘玉山;亓丽红;傅剑;;“禽喘康颗粒冲剂”对鸡人工感染新城疫病毒临床效果的研究[J];山东农业科学;2007年02期
10 吕慧贞;张建朋;陈新;刘静;张元湖;;一种改进的鸭梨总RNA提取方法[J];山东农业科学;2007年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 庄金秋;梅建国;沈志强;;赤羽病病毒检测方法研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
2 庄金秋;梅建国;沈志强;;犬瘟热病毒实验室检测方法研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
3 冷超粮;安同庆;田志军;;猪繁殖与呼吸综合征病毒中和抗体的研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
4 马玉萍;王向鹏;赵钦;王承宝;周恩民;;PRRSV细胞受体CD163的真核表达及鉴定[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
5 唐娜;曲光刚;王金良;苗立中;肖跃强;张倩;沈志强;;山东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及ORF4、ORF5基因遗传特性分析[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
6 孔宁;高继明;马玉萍;赵钦;王承宝;肖一红;周恩民;;高致病性PRRSV感染处于不同细胞周期Marc-145细胞的比较分析[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
7 蒋再学;陈征兵;林文;余邵华;竺薇;张晓明;罗满林;;仔猪伪狂犬PCR鉴定及病毒分离[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
8 陈宗艳;朱英奇;李传峰;李露;付玉志;王超;刘光清;;新发鸭源呼肠孤病毒(TH11株)的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
9 王珊;刘冰;李德朋;孙远;马勇;田秀丽;宋宇;王承宇;张乃生;;马蹄香治疗犬细小病毒性肠炎的疗效观察[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨学术研讨会论文集(下册)[C];2011年
10 程晶;荫硕焱;盖新娜;郭鑫;杨汉春;;2006—2008年我国部分地区规模化猪场PRV血清流行病学调查[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵冬敏;B亚群禽白血病病毒分离株的生物学特性[D];山东农业大学;2010年
2 赵鹏;猪繁殖与呼吸综合征病毒在抗体选择压下的变异[D];山东农业大学;2010年
3 刘栋;畜禽补体C3d基因克隆及序列分析和重组鸡C3d免疫佐剂效果研究[D];山东农业大学;2010年
4 张青婵;A亚群禽白血病病毒不同分离株的基因组和生物学特性比较[D];山东农业大学;2010年
5 宋翠平;H5N1禽流感和鹅Ⅰ型副粘病毒分离株的生物学特性及感染性的研究[D];中国海洋大学;2010年
6 梁勇;白念珠菌高铁还原酶基因表达调控及Aft2p转录因子的功能研究[D];南开大学;2010年
7 于双妮;胰腺癌差异表达microRNAs的鉴定及功能研究[D];北京协和医学院;2008年
8 黄馨;端粒缩短影响原发性高血压及其并发症的发生[D];北京协和医学院;2010年
9 张琪;KLT对中脑神经系统疾病的影响及KLT、NDV、SW联合抗肿瘤作用机制研究[D];西北农林科技大学;2010年
10 熊义;IRES调控α-干扰素的抗FMDV研究[D];武汉大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 宋飞;猪圆环病毒2型(WH株)和猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒混合感染致病性的研究[D];华中农业大学;2010年
2 许媛媛;鸭瘟的动态病理学研究和鸭CD4的克隆[D];华中农业大学;2010年
3 李爽;鸭源禽呼肠孤病毒感染雏鸭的免疫病理学研究[D];华中农业大学;2010年
4 李燕;猪干扰素刺激基因ISG20的克隆、真核表达及其对PRRSV增殖的影响[D];华中农业大学;2010年
5 徐珊珊;重组杆状病毒介导的高致病性猪繁殖与呼吸综合征基因工程疫苗研究[D];华中农业大学;2010年
6 肖犟;PRRSV对断奶仔猪生产性能和免疫力相关指标的影响[D];华中农业大学;2010年
7 王艳伟;PRRSV感染激活RANTES产生的信号通路研究[D];华中农业大学;2010年
8 胡智斌;湖北省高致病性猪蓝耳病活疫苗(JXA1-R株)试用报告[D];华中农业大学;2010年
9 朱晓娟;重组免疫毒素抗c-Met/PE38KDEL的构建、表达、纯化及初步鉴定[D];南京医科大学;2009年
10 许莹;H3N8型马流感血凝素核酸疫苗的初步研究[D];南京医科大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵坤,张慧辉,郭东升;猪繁殖和呼吸综合征组织灭活苗的研制[J];安徽农业科学;2005年07期
2 赵坤,李敬玺,王三虎,王丽荣,王承民,李军民;河南地区PRRS的病原分离鉴定及血清学调查[J];安徽农业科学;2005年09期
3 唐宁;全球猪生殖与呼吸综合征(PRRS)概况[J];国外畜牧学(猪与禽);1999年01期
4 胡少昶,陈伟光;需要对猪繁殖呼吸综合征持续进行监测[J];国外畜牧学(猪与禽);1999年02期
5 姜平,简中友,马志勇,蔡宝祥,张振兴;中国某地区猪繁殖和呼吸综合征流行病学调查及病毒分离[J];南京农业大学学报;1996年03期
6 高志强,郭鑫,查振林,陈艳红,杨汉春;猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因的变异分析[J];农业生物技术学报;2004年03期
7 张婉华,叶向阳,祁贤,朱永军,赵本进,彭丽英,陈晓清;猪繁殖呼吸综合征弱毒疫苗的研制[J];上海农业学报;2005年01期
8 王玉娥,杨汉春,郭鑫,查振林,陈艳红;猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5羧基端抗原表位的鉴定[J];畜牧兽医学报;2004年04期
9 于学辉,刘内生;猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫效果观察[J];畜牧与兽医;2000年01期
10 严若峰,谢三星;猎繁殖—呼吸综合征血清学诊断研究进展[J];中国动物检疫;1999年03期
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1 李庆江;赵长城;;猪繁殖与呼吸综合症的诊断[J];畜牧兽医杂志;2008年02期
2 夏平安;崔保安;张红英;梁宏德;杨霞;陈丽颖;;特异性中和抗体终止猪体内猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制[J];中国兽医学报;2006年04期
3 杨晓伟;赵光伟;刘子勇;;重庆部分地区猪无名高热病例中PRRSV的RT-PCR检测[J];畜禽业;2007年08期
4 李凯年;用位点杂交检测细胞培养物和组织中的PRRSV[J];畜牧兽医科技信息;1997年12期
5 邱昌庆;美国中西部地区PRRSV分离株的基因差异[J];畜牧兽医科技信息;1999年03期
6 邱昌庆;用PRRSV分离株制备抗原与抗血清反应[J];畜牧兽医科技信息;1998年02期
7 张婉华,叶向阳,祁贤,朱永军,陆鑫芳;PRRSV-S_A株在组织培养上增殖及某些生物学特性[J];上海畜牧兽医通讯;2002年05期
8 乐敏,陈焕春,邱德新,钱平;猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展[J];上海畜牧兽医通讯;2004年03期
9 卢高峰;夏平安;邱璜;李伟娟;王中明;刘明莉;;PRRSV Hn-1/06株GP5蛋白基因的克隆及表达载体的构建[J];安徽农业科学;2008年26期
10 苏晓鸥;李玉荣;乔俊文;赵德明;;猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)检测方法的建立[J];河北农业大学学报;2009年01期
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1 夏平安;李艳伍;张红英;杨霞;崔保安;卢中华;;猪繁殖与呼吸综合征和猪流感复合RT-PCR诊断方法的建立及应用[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
2 王金凤;张岭岭;王娇;赵泽坤;孙继国;袁万哲;;高致病性PRRSV河北地方株的分离鉴定及部分Nsp2基因变异分析[A];中国畜牧兽医学会食品卫生学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2010年
3 韩庆安;朱振荣;张永辉;张子佳;刘红;尹克勇;杨刚;王玉清;;2004~2008年河北省规模猪场PRRSV感染情况调查[A];2010畜牧业与低碳经济科技论文集[C];2010年
4 文明;毛君婷;史开志;周碧君;王开功;;贵州省猪繁殖与呼吸综合征分子流行病学调查[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(下册)[C];2010年
5 夏平安;崔保安;张红英;杨霞;陈丽颖;王亚宾;王新卫;卢中华;;特异性中和抗体终止猪体内PRRSV复制[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集(上)[C];2005年
6 蒋文明;姜平;李玉峰;吴胜昔;许家荣;;由减毒沙门氏菌介导的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)DNA疫苗的口服免疫应答[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
7 李广明;李玉峰;王先炜;王兴龙;姜平;;靶向PRRSV ORF1b基因shRNA重组腺病毒体内外抑制PRRSV复制[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(上册)[C];2009年
8 张冲;赵钦;孔宁;黄柏成;杜永坤;张昂克;孙鹏;刘洪亮;高继明;姬鹏超;王向鹏;周恩民;;新型PRRSV细胞受体阻断蛋白在猪体内阻断作用初探[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
9 韩先杰;王金宝;王宏伟;;猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(PRRSV)TCID_(50)的测定[A];猪的重要传染病防治研究新成果——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会论文集[C];2002年
10 陈义平;刘秀梵;;PRRSV的免疫生物学特性[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(上)[C];2003年
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1 中牧;PRRSV活疫苗的使用[N];农民日报;2005年
2 农业部动物疫病诊断与流行病学中心主任 崔尚金博士;猪呼吸与繁殖综合征流行特点、危害状况及防制策略[N];中国畜牧兽医报;2005年
3 瑞普(保定)生物药业有限公司 李建丽;猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的特点及免疫机制[N];中国畜牧兽医报;2009年
4 余木;PRDC和疫苗的效果[N];中国畜牧报;2005年
5 布里;继续加大高致病性猪蓝耳病防控力度[N];中国畜牧兽医报;2007年
6 黄雄壮;桐城市全力防控高致病性猪蓝耳病[N];中国畜牧兽医报;2007年
7 记者 荣锋;我省紧急防控高致病性猪蓝耳病[N];发展导报;2007年
8 ;猪“高热病”疫情主要由高致病性猪蓝耳病引起[N];河北科技报;2007年
9 ;农业部兽医局局长贾幼陵介绍我国高致病性猪蓝耳病防控情况[N];江苏农业科技报;2007年
10 桂亮 罗五;散养户生猪免疫疫苗免费[N];江苏农业科技报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘永宏;高致病性猪繁殖与呼吸综合征病理学研究及其病毒的序列分析[D];内蒙古农业大学;2010年
2 张磊;感染PRRSV GD株强弱毒株Marc145细胞的差异表达基因筛选及调控研究[D];西北农林科技大学;2011年
3 李广明;靶向PRRSV及其PAM细胞病毒受体基因shRNA重组腺病毒的构建与抑制PRRSV复制研究[D];南京农业大学;2009年
4 蔡锦顺;PRRSV GP5与M蛋白重组犬2型腺病毒的构建及其免疫特性研究[D];吉林大学;2010年
5 邢凤;猪抗PRRSV相关基因的鉴定及功能分析[D];山东农业大学;2011年
6 王刚;高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株感染所致的免疫损伤及免疫调控机理[D];山东农业大学;2011年
7 方莹;激活NF-κB信号通路的高致病性PRRSV非结构蛋白的筛选及其作用机制研究[D];华中农业大学;2012年
8 周铁忠;辽宁省猪繁殖与呼吸综合征分子流行病学调查及免疫防制研究[D];吉林大学;2010年
9 郝晓芳;甘肃省猪繁殖障碍性疾病病毒性病原的分子流行病学调查及HP-PRRSV DNA疫苗的研究[D];中国农业科学院;2011年
10 杨永倩;HP-PRRSV HuN4株感染仔猪发病过程中蛋白质分子演化网络的系统生物学研究[D];西北农林科技大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵泽坤;高致病性PRRSV的RT-PCR鉴别诊断方法的建立及应用[D];河北农业大学;2010年
2 宫大庆;高致病性PRRSV HuN4株感染仔猪过程中淋巴结蛋白质组学研究[D];黑龙江八一农垦大学;2011年
3 荣福龙;高致病性PRRSV在仔猪体内动态分布和体外增殖特性的研究[D];东北农业大学;2010年
4 曹永芝;高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的气溶胶传播机制[D];山东农业大学;2010年
5 姚雪静;PRRSV安徽株的分离鉴定及感染仔猪病理学的研究[D];安徽农业大学;2010年
6 李珈莹;PRRSV GP4、GP5基因的克隆及原核表达[D];延边大学;2010年
7 王美君;临床健康猪群中PRRSV的分离与鉴定[D];山东农业大学;2010年
8 张冲;野猪源PRRSV Shaanxi-2株分离鉴定、全基因测序及遗传进化分析[D];西北农林科技大学;2010年
9 邱洪凯;蓝耳病病毒克隆测序、单克隆抗体制备及唾液酸粘附素的克隆表达[D];山东农业大学;2010年
10 李冉;2008-2009年我国部分地区猪繁殖与呼吸综合征分子流行病学分析[D];东北农业大学;2010年
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