裸燕麦糖蛋白的提取纯化及抗氧化作用研究

【摘要】： 糖蛋白是指由比较短,往往带分支的寡糖与多肽链共价连接而成的一类结合蛋白质,广泛分布于动物、植物和某些微生物中,具有增强免疫调节、抑制肿瘤、降低血糖、血脂、抗氧化、防衰老等作用。许多植物如大豆、甘薯、山药、芦荟等所含糖蛋白的医疗保健功效已经被研究证明。燕麦是起源于我国一种古老作物,在我国广泛种植。燕麦中含有丰富的蛋白、脂肪、维生素和矿物质,被誉为药食同源的粮食作物。 目前对燕麦的研究多集中在β-葡聚糖、蛋白质、淀粉和燕麦油上,对于燕麦糖蛋白的研究国内外尚未见报道。为了深入了解燕麦药理作用和保健功效,充分开发利用我国裸燕麦资源,本课题选取在我国北方产量丰富的裸燕麦麸皮为原料,利用现代分离纯化技术、仪器分析鉴定技术对燕麦糖蛋白的提取分离纯化、组成、结构及体外抗氧化性进行研究,主要成果如下: (1)采用盐溶液浸提法提取燕麦糖蛋白,在单因素试验的基础上以料液比、提取时间和提取温度作为考察因素,进行L9(33)正交试验,得出提取燕麦糖蛋白的最佳条件为:以0.6 mol/L的NaCl为提取溶液,料液比为1:30,温度70℃,提取2 h。 (2)采用Sevage法去除游离蛋白,经单因素和L9(33)正交试验,得出除游离蛋白的最佳条件为:样液和Sevage试剂比例3:1,氯仿:正丁醇6:1,去游离蛋白20 min,除游离蛋白3次。用乙醇沉淀燕麦糖蛋白,经实验得出乙醇加入量为70%时燕麦糖蛋白得率最高。 (3)燕麦糖蛋白浸提液经DEAE-52阴离子交换柱和SephadexG-100纯化后,得到一个主组分(OGP-3),经薄层色谱和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行鉴定,结果表明该组分纯度较高。 (4)水解前后的紫外光谱表明OGP-3含有O-糖肽键;红外光谱分析证明OGP-3既具有糖的特征吸收也具有蛋白的特征吸收,且糖苷键为吡喃型;高效气相色谱证明该糖蛋白中的单糖组分主要有阿拉伯糖、木糖、葡萄糖和半乳糖。 (5)体外抗氧化实验表明OGP-3对邻苯三酚自氧化产生的超氧阴离子、Fenton体系产生的羟自由基、DPPH自由基均能有效清除,并呈一定的剂量效应关系。