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SETD4敲除对小鼠巨噬细胞功能及免疫细胞分化影响的初步研究

牛世贤  
【摘要】:SET结构域(SET domain)是在果蝇3个调节因子Su(var)3-9、Enhancer ofzeste、Trithorax羧基末端的一段共同序列,含有SET结构域的蛋白同属于SET家族蛋白。研究发现,SET家族蛋白普遍有甲基转移酶的活性,可以将S-腺苷-L-甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM/AdoMet)的甲基基团转移到组蛋白或非组蛋白的N端,通过改变甲基化的修饰方式和作用位点,调控基因的表达。越来越多的研究表明,组蛋白甲基化修饰在炎症和肿瘤的发生发展中发挥重要作用。因此,研究SET家族蛋白功能有助于我们明确炎性疾病的发病机制和寻找新的治疗靶点。SETD4(SET domain-containing protein 4)为 SET 家族蛋白成员之一,是本课题组前期在用蛋白质组学技术研究内毒素休克发生机制时发现的差异蛋白。为深入探讨SETD4在炎症中的作用机制,课题组前期构建了Setd4基因全身敲除小鼠(SETD4-/-)。前期实验结果表明,Setd4基因敲除小鼠的巨噬细胞相较于对照鼠(SETD4+/+)的炎症反应减弱,TNF-α和IL-6 mRNA转录水平明显降低,但此效应是否是Setd4基因敲除影响了小鼠巨噬细胞的分化成熟和功能造成的尚不明确。因此,本课题以SETD4-/-小鼠与SETD4+/+小鼠为研究对象,初步探讨Setd4基因敲除对小鼠巨噬细胞的分化成熟、功能以及外周血和脾脏中免疫细胞的分化和免疫器官发育的影响。另外,我们还通过生物信息学技术和实时荧光定量PCR实验明确了Setd4基因的表达情况。实验结果表明,SETD4在小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及胸腺中存在差异性表达,并且小鼠肝脏中SETD4mRNA的表达水平最高;与SETD4+/+小鼠相比,SETD4-/-小鼠巨噬细胞受到LPS刺激后,TNF-α、IL-6的释放明显减少,但是两组小鼠巨噬细胞的比例及分化成熟程度无明显差异,吞噬细菌能力和迁移能力无明显差异;SETD4-/-小鼠外周血及脾脏免疫细胞的比例和数量与SETD4+/+小鼠相比没有明显差异;SETD4-/-小鼠胸腺和脾脏的脏器指数及结构与SETD4+/+小鼠相比无明显差异。基于上述结果得出以下结论,SETD4在各脏器组织中存在差异性表达;SETD4能促进炎性细胞因子TNF-α、IL-6的产生,但对小鼠巨噬细胞的分化成熟及吞噬细菌、迁移能力无明显影响;Setd4基因敲除对小鼠外周血及脾脏免疫细胞的分化没有明显影响,对胸腺和脾脏的发育无明显影响。


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