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《中国科学院研究生院(大连化学物理研究所)》 2004年
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牛肾上腺髓质嗜铬细胞的分离纯化及其效果评价

张晓慧  
【摘要】:尽管大量研究显示出肾上腺髓质嗜铬细胞(AMCC)移植在疼痛治疗中的显著效果,但将其作为基本治疗方法用于临床还存在许多困难,其中有限的细胞来源是AMCC 移植广泛应用的最大障碍。牛的肾上腺由于髓质细胞产量大、易分离获取而成为首选的供体来源。但利用目前通常采用的分离纯化方法得到的AMCC,不仅细胞产率、纯度低,而且工艺成本高,很难满足临床大量移植的需要。 为此,本文在现有AMCC 分离纯化工艺基础上,结合本实验室的研究基础和实验条件,建立了牛肾上腺髓质嗜铬细胞(BCC)的分离纯化方法,并通过体外生物学特性及体内移植止痛的实验研究对BCC 功能进行了评价。 采用胶原酶灌注、机械分离及Percoll 非连续密度梯度离心的方法获得纯化的BCC,平均每个肾上腺可得到0.7~3.1×10~8个BCC,而且存活率在99%以上,纯度大于95%。 随着体外培养时间的延长,BCC 胞浆变暗、胞膜皱缩,细胞存活率及儿茶酚胺含量也逐渐下降,但葡萄糖和乳酸浓度无明显变化。说明BCC 在体外培养具有分泌儿茶酚胺功能活性,但代谢速率极低。 通过对大鼠蛛网膜下腔BCC 移植镇痛效果的考察,发现ACA 微囊化BCC 对急、慢性疼痛模型大鼠都有显著的止痛作用,但BCC 移植由于产生免疫排斥反应而导致镇痛效果不明显或产生后很快消失。 通过对冷冻保存前后BCC 形态、存活率、损伤及功能活性的考察,发现冷冻保存可以作为保持BCC 功能活性的有效方法,而且微胶囊可以降低冻存过程对细胞造成的损伤。 总之,本论文建立的机械分离为主、胶原酶灌注消化为辅的BCC 分离方法以及Percoll非连续密度梯度离心的BCC纯化方法可以为AMCC 移植的广泛临床应用提供高产率、高纯度、高活性的充足、健康的细胞来源。
【学位授予单位】:中国科学院研究生院(大连化学物理研究所)
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R-331;Q813

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