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《中国科学院研究生院(大连化学物理研究所)》 2004年
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基于毛细管电泳的基因分析方法及肿瘤遗传背景研究

石先哲  
【摘要】:恶性肿瘤是与遗传明确相关的“基因病”之一,肿瘤遗传背景研究对肿瘤发生的早期预防及肿瘤基因治疗具有重要意义。  本论文以自制线性聚丙烯酰胺为分离介质,建立了检测错配修复基因突变的单链构象多态性-毛细管电泳分析方法,并系统研究了温度、甘油添加剂等因素对单链DNA 构象分析的影响。结果表明:温度对不同碱基序列的单链DNA 构象影响不同;甘油通过与分离介质中的硼酸反应,改变了分离介质的特性,从而提高了单链DNA构象的分离。 在毛细管电泳上建立了检测hMLH1 基因启动子区甲基化的限制性内切酶PCR 法和甲基化敏感的单链构象分析法,提高了甲基化的检出率。 在ABI 310 型基因分析仪上,用多色荧光标记检测和自制分析试剂盒,建立了检测微卫星不稳定性和杂合性缺失的方法,并系统研究了尿素变性剂和温度对微卫星分析和微卫星片段长度的影响。结果表明在60℃下,分离介质中添加8mol/L尿素可以完全消除二级结构,使微卫星片段的标定长度趋于其真实长度;建立的方法可以同时检测5 个微卫星位点,而且能检测出单碱基漂移和定量检测杂合性缺失。 利用上述基于毛细管电泳的基因分析平台,筛查了家族性胃癌、多原发癌和散发性癌症中错配修复基因hMLH1、hMSH2 和癌基因K-ras 的突变,hMLH1 基因启动子甲基化以及微卫星不稳定性情况。结果在hMLH1 基因的exon8、exon12 和exon16 上发现突变,其中exon16 T1775G点突变是国际上未曾报道过的一种新的hMLH1 基因突变形式,而且可能是我国胃癌家系突变热点。此外还发现hMLH1 基因突变与多原发癌的发生关系密切;散发性肿瘤中,造成错配修复基因hMLH1 功能失活的主要原因是hMLH1 启动子甲基化,hMLH1 基因突变只起次要作用;而且有错配修复基因hMLH1 功能缺陷容易导致微卫星不稳定发生和癌基因K-ras 突变。
【学位授予单位】:中国科学院研究生院(大连化学物理研究所)
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R73-3

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【参考文献】
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【共引文献】
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9 马勋;陆承平;;猪戊型肝炎病毒新疆分离株全基因序列的分析[A];中国科协2005年学术年会“新疆现代农业论坛”论文专集[C];2005年
10 吴晓娟;冷梅;赵大鹏;崔颖杰;张岩;汪春义;戚凤春;郭新;付学奇;;带有IL-2基因佐剂的乙肝病毒DNA疫苗构建及其免疫效果的观察[A];2006年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2006年
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3 姜永厚;新城疫病毒F基因与鸡IL-2重组DNA疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
4 崔俊;c-fms癌基因异常激活机制及携带AFP增强子反义c-fms与肝癌的研究[D];第一军医大学;2000年
5 陈烨;幽门螺杆菌粘附素HpaA的克隆、表达及其免疫原性和保护性研究[D];第一军医大学;2000年
6 刘明;H5和H7亚型禽流感分子防制技术的研究[D];中国农业科学院;2000年
7 姚乌兰;多粘类芽孢杆菌WY110抗菌蛋白的制备及其基因克隆和表达[D];中国农业科学院;2000年
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9 吴健;肝移植病人乙型肝炎病毒再感染的临床和基础研究[D];浙江大学;2001年
10 宋福平;苏云金芽孢杆菌特殊异性cry基因的研究[D];东北农业大学;2001年
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1 宋磊;错配修复系统hMLH1基因A655G、T1151A多态与结直肠癌的相关性[D];南京医科大学;2010年
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3 赵学财;低阻抗型非接触式电导检测器的响应理论研究[D];山东师范大学;2011年
4 李玉荣;聚环氧乙烷无胶筛分毛细管电泳分离宽分子量范围DNA片段[D];山东农业大学;2011年
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6 刘波;稻蝗及其近缘属部分种RAPD多态性及中华稻蝗种群遗传多态性研究[D];陕西师范大学;2000年
7 郭巍;苏云金芽孢杆菌cry2Aa基因克隆及表达的研究[D];东北农业大学;2000年
8 刘怀然;鸡传统性法氏囊病抗独特型抗体疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
9 赫英俊;DNA分子标记技术在海带种质鉴定中的应用[D];中国科学院海洋研究所;2000年
10 桑红;新生隐球菌产黑素野生株与白化突变株酚氧化酶结构基因(CNLAC1)的比较研究[D];第二军医大学;2000年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前6条
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4 张振中,吴逸明,徐玉宝,吴如金;短链线性聚丙烯酰胺-毛细管电泳分析DNA片段[J];中国药科大学学报;2000年03期
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中国博士学位论文全文数据库 前3条
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中国硕士学位论文全文数据库 前2条
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【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
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2 赵文杰;赵晓寅;施国跃;周天舒;;毛细管电泳激光诱导荧光法用于TBBPA暴露下的大鼠体内谷胱甘肽含量影响的研究[A];第六届全国环境化学大会暨环境科学仪器与分析仪器展览会摘要集[C];2011年
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6 向彩云;孟祥英;梁汝萍;邱建丁;;毛细管电泳电化学发光在手性氨基酸分离中的应用[A];中国化学会第28届学术年会第9分会场摘要集[C];2012年
7 段海波;杨赟金;丁中涛;曹秋娥;;丹参中三种丹参酮的区带毛细管电泳分析[A];中国化学会第十五届全国有机分析及生物分析学术研讨会论文集[C];2009年
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3 谢路冰;基于ARM的毛细管电泳高压电源设计[D];大连理工大学;2010年
4 张海涛;毛细管电泳—电化学检测在疾病监测和中药分析中的应用研究[D];华东师范大学;2010年
5 盖丽娟;提高毛细管电泳表征中药材重现性的方法研究[D];河北大学;2010年
6 史海军;两种环糊精衍生物在毛细管电泳拆分常见手性药物中的应用研究[D];兰州大学;2010年
7 银慧慧;毛细管电泳—电化学发光在三种含胺类药物分析中的研究与应用[D];广西师范大学;2010年
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9 刘洋;毛细管电泳电化学发光在脑血管药物及甲醛分析中的研究和应用[D];广西师范大学;2010年
10 郝学超;毛细管电泳在线富集技术的研究[D];广西工学院;2010年
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