Alum-Pickering乳液疫苗佐剂的研究

【摘要】：长期以来,传染性疾病一直是人类健康的重大威胁之一,目前接种疫苗仍然是控制它的有效手段。现被批准临床应用的佐剂大多无法有效激活细胞免疫应答,且油乳佐剂存在需添加表面活性剂,并难以实现功能化修饰等缺陷,因此研发一种安全有效的疫苗佐剂尤为重要。针对上述问题,本研究工作提出了将油乳佐剂与铝佐剂相结合,构建颗粒稳定的乳液(Pickering乳液)。利用Pickering乳液在免疫应答上的独特优势,如可以增加与抗原提呈细胞的接触面积,动态促进免疫识别和应答等,从而提升免疫应答效果。与此同时,铝佐剂是经美国食品与药品管理局(Food and Drug Administration,FDA)批准临床应用的无机颗粒佐剂,储存不易降解,且具有良好的生物相容性。因此在提升疫苗佐剂效果的同时,可以增强Pickering乳液的储存稳定性。此外,由于Pickering乳液特殊的表面结构,抗原可以吸附在其缝隙中,从而起到一定保护抗原的作用,使抗原获得较好的热稳定性。具体研究内容如下:1.对目前市售的三种商品化铝佐剂进行筛选,以含有单磷酰脂质A(Monophosphoryl lipid A,MPLA)的角鲨烯为油相,铝佐剂为颗粒稳定剂,制备得到了可以在37℃下稳定储存4个月以上的Pickering乳液(油相中含有MPLA的Alum adjuvant-stabilized Pickering emulsion,ALMPE)。其粒径均一、分散性良好,同时具有良好的生物安全性。在OVA预防性疫苗中,ALMPE可以有效提高血清中特异性抗体IgG的滴度,促进脾细胞中IFN-γ分泌细胞的活化和增殖。装载MUC1和OVA抗原的ALMPE可以分别有效抑制B16/MUC1黑色素瘤和E.G7/OVA淋巴瘤细胞的生长,提高荷瘤小鼠的生存率。将重组疟疾抗原装载在含CpG的Pickering乳液(水相中含有CpG的Alum adjuvant-stabilized Pickering emulsion,ALPE-CpG)上,可以同时引发Thl和Th2型免疫响应,与弗氏佐剂组免疫效果相当,并且没有副反应发生。2.以异丙醇铝为原料,采用醇盐水解-水热法制备勃姆石纳米氢氧化铝颗粒,优化了水热反应条件,制备得到了结晶度高且均一性良好的勃姆石纳米氢氧化铝颗粒。以其作为稳定剂,含有单磷酰脂质A的角鲨烯作为油相,通过超声破碎法制备Pickering乳液(油相中含有MPLA的Bothmite-stabilized Pickering emulsion,BMPE),考察了颗粒浓度、水相成分、超声时间及功率对Pickering乳液粒径和稳定性的影响。成功制备得到了粒径均一、稳定性强的Pickering乳液。在OVA模式抗原的免疫实验中,其可以同时引发机体产生体液/细胞免疫应答。在乙肝疫苗初步热稳定性实验中,也展现出了对抗原具有一定的保护作用,为疫苗在不发达国家的运输及应用提供了便利。