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《中国科学院大学(中国科学院海洋研究所)》 2017年
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凡纳滨对虾肠道黏膜屏障对黄曲霉毒素B1和副溶血弧菌E1的响应

齐灿灿  
【摘要】:为探究凡纳滨对虾肠道黏膜的屏障作用,分别利用黄曲霉毒素B1(AFB1)和副溶血弧菌E1(VPE1)对凡纳滨对虾进行攻毒实验,从组织学及基因表达层面探究凡纳滨对虾肠道对毒素及弧菌的响应机制,以期为对虾的健康养殖、疾病防治提供理论依据。为探究AFB1对凡纳滨对虾肠道黏膜屏障的影响,以投喂含有15 mg/kg AFB1饲料的凡纳滨对虾作为实验组,不含AFB1饲料投喂的凡纳滨对虾作为对照组,分别于第2、4、8、12 d取肠道组织,采用实时荧光定量PCR检测mTOR信号通路中的真核细胞起始因子4E结合蛋白(eif4ebp),真核翻译起始因子1a(eif4e1a),真核翻译起始因子2(eif4e2)和核糖体s6蛋白激酶(p70s6k)基因,与免疫相关的转录因子Dorsal和Relish基因,酚氧化酶原(proPO)基因以及黏蛋白样围食膜因子(mucin-like PM)基因表达水平的变化,利用组织切片技术探究AFB1对肠道组织形态的影响。结果表明,AFB1的添加会对mTOR通路相关基因的表达产生影响,实验组对虾eif4ebp基因自第2 d起发生显著上调;eif4e2和eif4e1a基因皆在第8 d和第12 d被显著抑制;p70s6k基因在第2 d和第4 d呈现下调趋势,并于第12 d回升至初始水平。AFB1同时也刺激了免疫系统的响应,实验组Dorsal基因和Relish基因均被显著诱导;proPO基因于第4 d和第8 d显著上调并于第12 d回落至初始水平;mucin-like PM基因在第2-8 d均显著上调。AFB1的添加也破坏了凡纳滨对虾肠道正常的组织形态,出现上皮细胞核肥大,边缘模糊,上皮细胞层部分脱落等现象。结果表明,AFB1严重影响凡纳滨对虾肠道黏膜屏障的功能,不仅对肠道黏膜造成了机械损伤,同时对肠道化学屏障和免疫屏障产生了影响。利用转录组测序(RNAseq)技术及生物信息学分析,探究了VPE1感染12 h时凡纳滨对虾肠道中与肠道黏膜屏障功能相关的基因转录水平的变化,结果表明:(1)转录组测序原始数据经过质控、拼接后,共得到164,420条Unigene,将Unigene与Nr,Nt等7大数据库进行比对,共有48542条Unigene注释到至少一个数据库中,占全部Unigene的29.52%;(2)利用DEseq进行差异表达分析,得到差异表达的基因(Differentially expressed genes,DEGs)共4646个,其中上调的基因有2469个,下调的基因有2177个;(3)从DEGs中鉴别出可能参与到凡纳滨对虾肠道黏膜屏障对VPE1感染响应过程的基因,涉及到肠道黏膜的机械屏障、化学屏障和免疫屏障的相关功能,包括:围食膜因子,细胞骨架和细胞连接,模式识别受体,抗菌肽与免疫信号通路,丝氨酸蛋白酶/蛋白酶抑制剂与酚氧化酶系统,细胞凋亡与细胞吞噬,抗氧化系统等功能。(4)利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法对15个DEGs进行验证,验证结果与转录组结果一致。利用组织切片和透射电镜观察VPE1浸浴后凡纳滨对虾肠道组织与细胞形态结构的变化。结果表明:(1)VPE1感染后,肠道上皮细胞层结构被破坏,上皮细胞层与基膜分离;(2)透射电镜结果表明,VPE1感染后,肠道上皮细胞的结构发生变化,细胞连接被破坏,细胞间界限模糊;部分细胞的细胞核固缩,异染色质聚集在核膜内围,溶酶体出现在细胞核附近;部分细胞微绒毛脱落,细菌进入细胞内部并被囊泡包裹,细胞内部出现空洞,有凋亡小体出现。同时电镜观察结果在一定程度上与RNAseq差异表达基因的结果相互印证。转录组、组织切片与电镜结果表明,机械、化学及免疫屏障参与到凡纳滨对虾肠道对VPE1感染的响应过程中,在凡纳滨对虾肠道抵御弧菌感染的过程中发挥重要作用。上述结果有助于理解凡纳滨对虾肠道对弧菌及毒素的响应机制,可为对虾肠道黏膜屏障研究提供理论依据,所获得的大量转录本可为未来对虾基因组学的研究提供参考,为新基因的发现提供丰富的数据资源。
【学位授予单位】:中国科学院大学(中国科学院海洋研究所)
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S945.49

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 辛芳;王雷;刘梅;王宝杰;蒋克勇;孙国琼;;水产动物雷帕霉素受体信号通路的研究进展[J];海洋科学;2016年01期
2 夏青;王宝杰;刘梅;蒋克勇;王雷;;哈维氏弧菌浸浴后凡纳滨对虾肠道组织病理变化及转录水平的免疫应答[J];水产学报;2015年10期
3 李赵嘉;郭冉;曹英昆;夏辉;申亮;魏旭光;王静;;饲料中高浓度黄曲霉毒素B_1在凡纳滨对虾幼虾体内的残留及其影响[J];大连海洋大学学报;2015年03期
4 黄兴宇;;关于南美白对虾“白便”的分析[J];当代水产;2014年09期
5 翟双双;;肠道黏膜屏障机能及其调控研究进展[J];现代畜牧兽医;2014年07期
6 李赵嘉;申亮;魏旭光;郭冉;夏辉;;配合饲料中的黄曲霉毒素对对虾影响的研究进展[J];中国渔业质量与标准;2014年03期
7 孙艳;刘飞;宋晓玲;麦康森;李玉宏;黄倢;;饲料中添加益生菌对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)非特异免疫基因表达量和抗病力的影响[J];海洋与湖沼;2012年04期
8 曾东;唐雨蕊;倪学勤;冉君;;植物乳杆菌F22对肝脏和肠道微生物菌群的影响研究[J];营养学报;2010年04期
9 方静;何敏;崔恒敏;;重口裂腹鱼消化道黏膜的超微结构[J];中国兽医学报;2008年07期
10 李继秋;谭北平;麦康森;;白斑综合征病毒与凡纳滨对虾肠道菌群区系之间关系的初步研究[J];上海水产大学学报;2006年01期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 沙玉杰;乳酸菌对凡纳滨对虾益生机理的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2016年
2 于爱清;虾蟹类免疫相关基因的研究[D];华东师范大学;2014年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 辛芳;凡纳滨对虾mTOR信号通路中重要基因的克隆和功能的初步研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2016年
2 职通瑞;饲料中补充有益菌对凡纳滨对虾抗病力及其肠道微生物组成影响的研究[D];上海海洋大学;2014年
3 宋洪国;黄曲霉毒素B_1对肉鸭消化道结构和功能、血液生化指标及生产性能的影响研究[D];湖南农业大学;2012年
【共引文献】
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1 韦光本;唐黎;;南美白对虾养成期间病害防治技术的调查[J];河北渔业;2017年12期
2 张鑫;郭军;;益生菌与肠道黏膜免疫研究进展[J];畜牧与饲料科学;2017年11期
3 齐灿灿;王宝杰;刘梅;蒋克勇;赵伟;任春华;胡超群;王雷;;黄曲霉毒素B1(AFB1)的短期投喂对凡纳滨对虾肠道黏膜屏障的影响[J];水产学报;2017年12期
4 张晓晓;汪多;田相利;董双林;;包膜丁酸钠对凡纳滨对虾生长和血清非特异性免疫酶活性的影响[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2017年S1期
5 刘梦;王苓;田相利;董双林;;三种益生菌及其复合菌对凡纳滨对虾生长和血清非特异性免疫的影响[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2017年S1期
6 李诗言;柯庆青;王鼎南;周凡;贝亦江;郑重莺;王扬;;QuEChERS-LC-MS/MS法测定水产配合饲料中4种常见黄曲霉毒素残留[J];中国渔业质量与标准;2017年05期
7 李玉锋;戴习林;袁新程;周迅;胡彦杰;丁福江;;四个罗氏沼虾抗病选择系抗病力比较分析[J];生物技术通报;2017年07期
8 刘云才;张娟;焦聪聪;崔莲花;蒋梦会;朴金梅;;乳酸菌对铜暴露大鼠肝功能及氧化应激的影响[J];青岛大学医学院学报;2017年02期
9 戚瑞荣;崔龙波;唐绍林;高珺珊;马家好;;凡纳滨对虾白便综合征的组织病理学观察[J];水产学杂志;2017年03期
10 汪多;田相利;董双林;王苓;潘哲;;不同饲料添加物对凡纳滨对虾生长和血清非特异免疫指标影响的研究[J];海洋湖沼通报;2017年03期
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1 齐灿灿;凡纳滨对虾肠道黏膜屏障对黄曲霉毒素B1和副溶血孤菌E1的响应[D];中国科学院大学(中国科学院海洋研究所);2017年
2 唐杨;假交替单胞菌胞外产物的特性分析及其抑菌蛋白的克隆与表达[D];上海海洋大学;2017年
3 郭倩倩;水体铜暴露对鲤肠道微生物群落结构及机体脂代谢的影响[D];河南师范大学;2016年
4 熊慧慧;黄曲霉毒素B_1对肉仔鸡生长性能及肝脏谷胱甘肽硫转移酶表达的影响[D];上海海洋大学;2016年
5 何伟聪;二种益生菌对军曹鱼幼鱼生长性能、免疫酶和消化酶活性、肠道菌群结构及TLR9基因表达量的影响[D];广东海洋大学;2015年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李茜;李建国;;动物分子营养学的研究进展[J];黑龙江畜牧兽医;2015年01期
2 阮灵伟;刘荣雕;徐洵;施泓;;Molecular cloning and characterization of a threonine/serine protein kinase lvakt from Litopenaeus vannamei[J];Chinese Journal of Oceanology and Limnology;2014年04期
3 吴群凤;杨宝琴;;中国工程院院士麦康森:水产动物营养参数研究至今仍不完整[J];水产科技情报;2014年03期
4 杨维维;刘文斌;沈美芳;唐建清;朱杰;钱妤;;海带粉对克氏原螯虾生长、非特异性免疫和肝胰脏抗氧化能力的影响[J];大连海洋大学学报;2014年01期
5 苗中兴;王玉杰;徐皓;;肠黏膜机械屏障的损伤与修复的相关研究[J];中国煤炭工业医学杂志;2013年10期
6 杨留冰;潘鲁青;;注射磷脂酰丝氨酸对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响[J];水产学报;2013年09期
7 吕宾;;肠黏膜屏障与肠功能障碍[J];现代消化及介入诊疗;2013年04期
8 王金勇;刘颖莉;关舒;;2012年中国饲料和原料霉菌毒素检测报告[J];中国畜牧杂志;2013年04期
9 于泳;郑鹏远;;肠道细菌、肠黏膜屏障与肠功能障碍[J];胃肠病学和肝病学杂志;2013年02期
10 王圣;李绍钰;;家禽肠道黏膜形态结构及其调控的研究进展[J];动物营养学报;2013年04期
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 董迎辉;泥蚶高通量转录组分析及生长相关基因的克隆与表达研究[D];中国海洋大学;2012年
2 严芳;甲壳动物血蓝蛋白免疫学活性及其作用机制研究[D];汕头大学;2011年
3 李伟微;基于中华绒螯蟹EST序列的深度发掘—免疫和营养相关基因的克隆与表达研究[D];华东师范大学;2011年
4 李风铃;鱼类适应性免疫系统的早期发生以及Ikaros基因的克隆和表达[D];中国海洋大学;2009年
5 杜欣军;中国明对虾先天免疫的模式识别与效应分子[D];山东大学;2007年
6 张玲;一株对虾肠道益生菌的筛选及其作用机理和应用效果的研究[D];中国海洋大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 于莎莎;浙江宁波地区部分海、淡水经济鱼类外寄生车轮虫的研究[D];重庆师范大学;2012年
2 严雪平;凡纳滨对虾肠道微生物宏基因组测序初步分析及培养条件的探讨[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
3 李娟娟;霉菌毒素吸附剂对饲料中黄曲霉毒素B_1吸附效果及特性研究[D];中国农业科学院;2009年
4 张秀明;海洋微生物高通量分离培养技术的建立及青岛近海微生物多样性研究[D];中国海洋大学;2009年
5 王慧容;三种霉菌毒素吸附剂对复合霉菌毒素中毒肉鸡解毒效果的研究[D];武汉工业学院;2008年
6 徐雪梅;葡甘聚糖复合吸附剂对肉鸡饲料中霉菌毒素混合污染的脱毒研究[D];华中农业大学;2008年
7 李海兵;对虾肠道益生菌的筛选与免疫物质活性评价指标的建立[D];中国海洋大学;2008年
8 胡源胜;混合霉菌毒素对鸡肠道损伤作用的研究[D];湖南农业大学;2007年
9 董秀娟;两株海洋有益菌快速检测方法的建立及其应用[D];中国海洋大学;2007年
10 李珊珊;养殖鲆鲽类细菌性病原的鉴定及免疫的初步研究[D];青岛科技大学;2007年
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1 游奎,刘鹰,杨红生,刘石林,俞立东;不同光源及光照时间对凡纳滨对虾生长的影响[J];海洋科学;2005年05期
2 林惠山;戚隽渊;乔燕平;;凡纳滨对虾高产养殖水质优化技术探讨[J];水产科技情报;2006年04期
3 衣萌萌;于赫男;林小涛;许忠能;周小壮;;密度胁迫下凡纳滨对虾的行为与生理变化[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);2012年01期
4 周歧存,丁燏,郑石轩,苏树峰,张磊;维生素C对凡纳滨对虾生长及抗病力的影响[J];水生生物学报;2004年06期
5 杨奇慧,周歧存;凡纳滨对虾营养需要研究进展[J];饲料研究;2005年06期
6 杨奇慧,周歧存;凡纳滨对虾营养需要研究进展(续)[J];饲料研究;2005年07期
7 江湧,王广军 ,余德光;中草药添加剂对凡纳滨对虾生长和抗病力影响的研究[J];渔业现代化;2005年04期
8 罗杰,钟志华,罗伟林;凡纳滨对虾(Litopenaeus Vannamei)高位池养殖中几个单项因子试验[J];海洋湖沼通报;2005年03期
9 张才学,黎运积;凡纳滨对虾生态养殖新方法的研究[J];海洋科学;2005年09期
10 陈涵贞;陈人弼;罗钦;陈卫伟;;火焰原子吸收光谱法测定凡纳滨对虾中的镉[J];福建农业学报;2005年S1期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 丁燏;简纪常;吴灶和;;凡纳滨对虾生态养殖高位池优势菌群及其部分生物学特性的研究[A];全国畜禽和水产养殖污染监测与控制治理技术交流研讨会论文集[C];2008年
2 黄皓;刘小林;吴长功;陈锚;张树勇;;海南省凡纳滨对虾的引种和选育[A];中国动物学会甲壳动物学分会、中国海洋与湖沼学会甲壳动物学分会2004年甲壳动物学分会会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2004年
3 杨彦豪;陈晓汉;;分子标记技术在凡纳滨对虾中的应用进展[A];2007年中国水产学会学术年会暨水产微生态调控技术论坛论文摘要汇编[C];2007年
4 陈文霞;申玉春;;不同投喂策略对凡纳滨对虾生长的影响[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
5 管越强;王慧春;康现江;;虾青素对凡纳滨对虾的免疫防护和抗氧化酶基因转录的影响[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
6 么宗利;周凯;王慧;应成琦;来琦芳;;碱度胁迫下凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)基因表达差异研究[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
7 张家松;李卓佳;罗亮;;不同碳源在凡纳滨对虾不换水养殖中的应用研究[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
8 阮晓红;罗坤;栾生;孔杰;许圣钰;陈荣坚;陈国良;;凡纳滨对虾7个引进群体生长性能评估[A];2012年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2012年
9 刘穗华;曹俊明;黄燕华;赵红霞;李国立;蓝汉冰;严晶;张荣斌;刘丽;;植物油替代鱼油对凡纳滨对虾的生长性能和肝体比的影响[A];2009年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2009年
10 赵红霞;曹俊明;黄燕华;李国立;蓝汉冰;王安利;;饲料中长期添加β-1,3-葡聚糖对凡纳滨对虾生长、生化指标和免疫功能的影响[A];2009年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前8条
1 缪翼;“低盐凡纳滨对虾饲料风味改良剂”获国家专利[N];中国渔业报;2010年
2 吴凡;“低盐养殖凡纳滨对虾食味劣化及调控”通过鉴定[N];中国渔业报;2010年
3 福闻;凡纳滨对虾选育技术通过验收[N];中国渔业报;2012年
4 南方日报记者 曹斯 林亚茗 通讯员 李洁尉 实习生 罗恒;凡纳滨对虾从南美游到中国[N];南方日报;2013年
5 中国水产科学研究院;“凡纳滨对虾工程化高效健康养殖技术集成与示范”项目取得阶段性成果[N];中国渔业报;2014年
6 中国水产科学研究院;中国对虾“黄海2号”及凡纳滨对虾优良苗种通过专家现场验收[N];中国渔业报;2012年
7 本报记者 毛永彬;求真务实勤探索 海洋养殖焕生机[N];广东科技报;2012年
8 ;专家纵论2010年农业产业发展特点[N];农民日报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 沙玉杰;乳酸菌对凡纳滨对虾益生机理的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2016年
2 刘勇杰;凡纳滨对虾丝氨酸蛋白酶抑制因子(Serpins)的鉴定及调控功能研究[D];西北农林科技大学;2017年
3 刘晓华;谷胱甘肽对凡纳滨对虾抗氧化防御的调控机理[D];华中农业大学;2010年
4 朱素芹;冷藏凡纳滨对虾特定腐败菌群体感应现象与致腐能力的研究[D];中国海洋大学;2015年
5 李喜莲;凡纳滨对虾肌肉组织中体重调控相关基因的筛选、克隆鉴定及功能研究[D];西北农林科技大学;2011年
6 张健;免疫增强剂对凡纳滨对虾幼虾生长、免疫及抗应激的影响[D];中山大学;2012年
7 罗展;凡纳滨对虾两种C-型凝集素的基因克隆和功能研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2010年
8 胡毅;凡纳滨对虾饲料配方优化及几种饲料添加剂的应用[D];中国海洋大学;2007年
9 于赫男;环境胁迫对罗氏沼虾和凡纳滨对虾行为、生长及生理活动的影响[D];暨南大学;2007年
10 郭彪;光照和温度波动对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)蜕皮和生长的影响及机制的初步研究[D];中国海洋大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 齐灿灿;凡纳滨对虾肠道黏膜屏障对黄曲霉毒素B1和副溶血弧菌E1的响应[D];中国科学院大学(中国科学院海洋研究所);2017年
2 林建伟;基于氨基酸平衡的鸡肉粉替代鱼粉的配合饲料对凡纳滨对虾生长性能的影响[D];集美大学;2015年
3 陈庭;鸡肉粉替代鱼粉饲料中添加包被氨基酸对凡纳滨对虾生长的影响[D];集美大学;2015年
4 齐飞;四种物质对凡纳滨对虾利用植物蛋白的影响[D];华中农业大学;2015年
5 陈诗妍;凡纳滨对虾死后胰蛋白酶的迁移及其对肌肉蛋白的降解作用[D];广东海洋大学;2015年
6 殷桂芳;噁喹酸在凡纳滨对虾体内药动学及对弧菌的体外药效学[D];上海海洋大学;2015年
7 刘军;凡纳滨对虾温棚高位池养殖密度及简易水质调控措施研究[D];上海海洋大学;2015年
8 刘珍;虾肝肠胞虫实时荧光定量PCR检测技术的建立及其与对虾生长相关性的研究[D];上海海洋大学;2015年
9 王刚;凡纳滨对虾免疫基因克隆与合并感染条件下的免疫应答[D];广东海洋大学;2015年
10 胡志国;凡纳滨对虾选育基础群体的建立及生长性状遗传参数的估计[D];广东海洋大学;2015年
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