海洋经济动物精子超低温保存的研究

李纯  

【摘要】： 从1949年以来经过近五十年的发展，超低温保存种质细胞技术已经趋于 成熟，特别是在家畜推广良种化的过程中发挥重要作用。对海洋动物种质细胞 保存研究的范围主要集中在鲑鳟鱼类和牡蛎等少数几种海洋生物上。本研究结 合“国家自然科学基金”研究项目，进行了三种贝类和两种鱼类精子的超低温 保存实验，得到了它们在液氮（－196℃）条件下的适宜保存条件。 栉孔扇贝（Chlamys farreri）冻精解冻后复苏比例、受精率和孵化率最高 可达到49.39％、42.06％和12.15％。栉孔扇贝精子超低温保存时发生冷冻伤害 的温度范围在－30℃～－60℃；其低温保存的最适降温速率为20℃/min；使用 抗冻剂二甲基亚砜（DMSO）的最适浓度为5％，其保存效果优于甘油；样品 保存的最佳体积为0.6ml～1ml；解冻精子的最适水温为35℃，50℃次之，20℃ 最差；用自然海水激活解冻后精子的效果好于低盐度溶液；在0℃进行预处理 平衡时间不宜太长；在抗冻液中加入蛋黄对保存效果没有改善，并且会对冻精 的孵化率有抑制作用；用20℃/min和5％DMSO冷冻精子，液氮中保存栉孔扇 贝精子55天后其复苏比例达到42.17％。 超低温保存紫贻贝（Mytilus galloprovincialis Lamarck）精子，解冻后其复苏 比例、受精率和孵化率最高可达到41.63％、69.52％和54.74％。保存紫贻贝精 子最适降温速率为5℃/min，发生冻伤的温度范围是－20℃～－60℃；使用抗冻 剂DMSO的保存效果好于甘油，且使用抗冻剂DMSO的最适浓度为15％；利用 自然海水激活冻精效果好于低盐度或高pH值的溶液；样品体积（在0.2～1ml 之间）对保存效果没有影响；采用15％DMSO和5℃/min的降温速率处理精子， 液氮中保存90天后复苏比例仍达到41.8％。 保存菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum (Adams and Reeve)）精子的最适 降温速率为5℃/min，发生冻伤的温度范围是－30℃～－60℃；抗冻剂DMSO的 保存效果好于甘油，也胜于DMSO与甘油混合使用，使用抗冻剂DMSO的最适 浓度为10％；利用自然海水激活冻精效果好于低盐度或高pH值的溶液；样品 体积（在0.2～1.6ml之间）对保存效果有显著影响。冷冻保存后精子复苏比例、 受精率和孵化率最高达到40.84％、68.87％和47.17％；以最适降温速率和抗冻 李纯 中国科学院海洋研究所硕士学位论文 剂浓度处理精子，并在液氮中保存36天后冻精复苏比例仍可以达到38．54％。 黑蛔warns macrocePhalus）精子经过超低温保存后复苏率、存活率最高可 以达到61．37％和61．4％。保存黑鳃精子时发生冷冻伤害的温度范围是一20C～ 一60C，适宜的降温速率为 20Clndfi：使用抗冻剂 DMSO的适宜浓度为 20％； 样品体积对保存效果有相关性；利用自然海水激活冻精效果好于低盐度或高pH 值的溶液；使用20％DMSO和20Clndn降温速率处理，在液氮中保存黑鳃精 子66天后解冻，其复苏率和存活率分别为59．sl％和58．45％。 在液氮中保存真绸（Pagrosomus major）精子时发生冷冻伤害的温域为一30 OC—一60 C，适宜的降温速率为2 0 C IITiln；使用抗冻剂DMSO的适宜浓度为20 ％；采用低盐度或高PH值的溶液激活冻精的效果不如自然海水。真鳃冻精的 复苏率和存活率最高可达到5073％和62．5％；以20Clndn和20％DMSO处理 真绸精子，保存在液氮中46天后冻精复苏率和存活率为50．63％和61．02％。 通过对多种贝类和鱼类精子的超低温保存实验，不仅获得超低温保存基本 条件，并且通过显微镜观察结合前人的研究，对产生冻伤的原因和保护的机理 提出了一个模式。

【关键词】：超低温保存 栉孔扇贝 紫贻贝 菲律宾蛤仔 黑鲷 真鲷 精子
【学位授予单位】：中国科学院海洋研究所
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2000
【分类号】：S917.4
【DOI】：CNKI:CDMD:2.2000.000931
【目录】：

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