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《中国科学院海洋研究所》 2000年
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海洋经济动物精子超低温保存的研究

李纯  
【摘要】: 从1949年以来经过近五十年的发展,超低温保存种质细胞技术已经趋于 成熟,特别是在家畜推广良种化的过程中发挥重要作用。对海洋动物种质细胞 保存研究的范围主要集中在鲑鳟鱼类和牡蛎等少数几种海洋生物上。本研究结 合“国家自然科学基金”研究项目,进行了三种贝类和两种鱼类精子的超低温 保存实验,得到了它们在液氮(-196℃)条件下的适宜保存条件。 栉孔扇贝(Chlamys farreri)冻精解冻后复苏比例、受精率和孵化率最高 可达到49.39%、42.06%和12.15%。栉孔扇贝精子超低温保存时发生冷冻伤害 的温度范围在-30℃~-60℃;其低温保存的最适降温速率为20℃/min;使用 抗冻剂二甲基亚砜(DMSO)的最适浓度为5%,其保存效果优于甘油;样品 保存的最佳体积为0.6ml~1ml;解冻精子的最适水温为35℃,50℃次之,20℃ 最差;用自然海水激活解冻后精子的效果好于低盐度溶液;在0℃进行预处理 平衡时间不宜太长;在抗冻液中加入蛋黄对保存效果没有改善,并且会对冻精 的孵化率有抑制作用;用20℃/min和5%DMSO冷冻精子,液氮中保存栉孔扇 贝精子55天后其复苏比例达到42.17%。 超低温保存紫贻贝(Mytilus galloprovincialis Lamarck)精子,解冻后其复苏 比例、受精率和孵化率最高可达到41.63%、69.52%和54.74%。保存紫贻贝精 子最适降温速率为5℃/min,发生冻伤的温度范围是-20℃~-60℃;使用抗冻 剂DMSO的保存效果好于甘油,且使用抗冻剂DMSO的最适浓度为15%;利用 自然海水激活冻精效果好于低盐度或高pH值的溶液;样品体积(在0.2~1ml 之间)对保存效果没有影响;采用15%DMSO和5℃/min的降温速率处理精子, 液氮中保存90天后复苏比例仍达到41.8%。 保存菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum (Adams and Reeve))精子的最适 降温速率为5℃/min,发生冻伤的温度范围是-30℃~-60℃;抗冻剂DMSO的 保存效果好于甘油,也胜于DMSO与甘油混合使用,使用抗冻剂DMSO的最适 浓度为10%;利用自然海水激活冻精效果好于低盐度或高pH值的溶液;样品 体积(在0.2~1.6ml之间)对保存效果有显著影响。冷冻保存后精子复苏比例、 受精率和孵化率最高达到40.84%、68.87%和47.17%;以最适降温速率和抗冻 李纯 中国科学院海洋研究所硕士学位论文 剂浓度处理精子,并在液氮中保存36天后冻精复苏比例仍可以达到38.54%。 黑蛔warns macrocePhalus)精子经过超低温保存后复苏率、存活率最高可 以达到61.37%和61.4%。保存黑鳃精子时发生冷冻伤害的温度范围是一20C~ 一60C,适宜的降温速率为 20Clndfi:使用抗冻剂 DMSO的适宜浓度为 20%; 样品体积对保存效果有相关性;利用自然海水激活冻精效果好于低盐度或高pH 值的溶液;使用20%DMSO和20Clndn降温速率处理,在液氮中保存黑鳃精 子66天后解冻,其复苏率和存活率分别为59.sl%和58.45%。 在液氮中保存真绸(Pagrosomus major)精子时发生冷冻伤害的温域为一30 OC—一60 C,适宜的降温速率为2 0 C IITiln;使用抗冻剂DMSO的适宜浓度为20 %;采用低盐度或高PH值的溶液激活冻精的效果不如自然海水。真鳃冻精的 复苏率和存活率最高可达到5073%和62.5%;以20Clndn和20%DMSO处理 真绸精子,保存在液氮中46天后冻精复苏率和存活率为50.63%和61.02%。 通过对多种贝类和鱼类精子的超低温保存实验,不仅获得超低温保存基本 条件,并且通过显微镜观察结合前人的研究,对产生冻伤的原因和保护的机理 提出了一个模式。
【学位授予单位】:中国科学院海洋研究所
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2000
【分类号】:S917.4

【引证文献】
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1 豆伟;马氏珠母贝精子质量检测方法的研究[D];广东海洋大学;2011年
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【参考文献】
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【共引文献】
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4 豆伟;马氏珠母贝精子质量检测方法的研究[D];广东海洋大学;2011年
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【同被引文献】
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【二级引证文献】
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【二级参考文献】
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