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编码四种甲壳动物蜕皮抑制激素的部分cDNA的克隆和序列分析

王在照  
【摘要】: 本文分别提取了中国对虾、中华绒螯蟹、鹰爪虾和蓝对虾的眼柄总RNA。 用无DNA污染的眼柄总RNA为模板,根据日本对虾的MIH设计兼并引物P1 和P2,进行RT-PCR扩增,在适宜的反应条件下,均分别得到一特异性的产物。 以蓝对虾基因组DNA为模板的PCR扩增也能得到一与特异性cDNA片段大小 相似的特异性的DNA片段。分别将这些片段亚克隆到载体中进行测序,测得 中国对虾特异性cDNA片段由203个碱基组成,中华绒螯蟹、鹰爪虾、蓝对虾 的特异性cDNA片段及蓝对虾的特异性DNA片段由215个碱基组成,其中蓝 对虾的特异性cDNA与由蓝对虾的基因组DNA扩增得到的特异性DNA片段的 碱基序列几乎完全相同。利用互联网上的在线工具Fasta3查找由这些cDNA推 定的氨基酸序列的相似序列,可以发现大量的甲壳动物的CHH家族的神经肽与 它们相似。 在所有的相似序列中,分别由中国对虾、中华绒螯蟹、鹰爪虾和蓝对虾的 特异性cDNA片段推定的氨基酸序列与蜕皮抑制激素(MIH)的相似度最高, 这一结果提示分别由中国对虾、中华绒螯蟹、鹰爪虾和蓝对虾的眼柄特异性 cDNA片段推定的氨基酸序列可能是这四种甲壳动物的MIH片段。 根据核苷酸数据和氨基酸数据,比较这四种甲壳动物的MIH以及已发表的 六种MIH之间的相似度,同时分析这十种MIH的系统进化关系,结果是蓝对 虾、鹰爪虾和中华绒螯蟹的MIH相似性较高,亲缘关系较近,这与物种的系统 演化不相符。


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