麻痹性贝毒毒素的制备和活性研究

【摘要】： 麻痹性贝毒（Paralytic Shellfish Poisons，PSP）毒素主要是由海 洋甲藻产生的一类活性物质，在赤潮毒素监测、神经与分子生物学基 础研究以及新型药物开发方面都有潜在的应用价值。然而，纯化毒素 的缺乏在很大程度上限制了相关工作的开展。本文通过大量培养塔玛 亚历山大藻（Alexandrium tamarense）来提取PSP毒素，完善了毒素的 分离纯化过程，并对纯化毒素的活性进行了研究和探讨。 在实验室进行了塔玛亚历山大藻的规模培养，对其生长和培养条 件进行了优化，探讨了有毒藻大量培养的采收方式，并获取了一批用 于纯化毒素的有毒藻细胞。 将藻细胞破碎后离心分离，提取出含PSP的粗毒素，再用大孔径 凝胶过滤去除粗毒素中的大部分杂质，然后用小孔径凝胶和离子交换 树脂将不同毒素逐级分离、纯化。结果表明，大孔径凝胶能有效地去 除粗毒素中的杂质，小孔径凝胶过滤能将膝沟藻毒素（GTX）和C毒 素分开，应用离子交换树脂能将GTX2,3和GTX1,4分开，最终得到 GTX2,3和GTX1,4的纯化产品。分离纯化过程始终以小鼠法和荧光法 进行毒素在线监测。 以提取的毒素对小鼠进行毒性测试，小鼠呈现典型的PSP毒素中 毒死亡症状；电生理分析的结果表明PSP毒素能够有效地阻断小鼠运 动神经末梢钠电流，并可逆地阻断NG108-15全细胞的钠电流，与PSP 毒素的作用机理一致；高效液相色谱分析结果表明，纯化毒素与标准 毒素的保留时间完全一致；经质谱分析，纯化毒素与标准毒素具有相 同的分子离子峰和碎片离子峰。 应用动物模型研究了纯化毒素的药理活性。分别采用家兔椎管麻 醉法、小白鼠热板法、小白鼠攀网法研究了GTX2,3对家兔的局麻作用、 对小鼠的镇痛和肌松作用。结果表明，GTX2,3按剂量0.4μg STX equivalent/kg给予家兔椎管注射时，具有显著的局麻作用。GTX2,3按 剂量5.99μg STX equivalent/kg给予小鼠肌肉注射时，具有显著的镇痛 作用。GTX2,3按剂量6.49μg STX equivalent/kg给予小鼠皮下注射时， 具有显著的肌松作用。

【关键词】：麻痹性贝毒毒素 膝沟藻毒素 制备 活性
【学位授予单位】：中国科学院海洋研究所
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：R284
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