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《中国科学院研究生院(海洋研究所)》 2006年
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栉孔扇贝(Chlamys farreri)Toll样受体及其信号传递相关基因的克隆与表达

邱丽梅  
【摘要】:扇贝是我国海水养殖的重要品种,但自1994年以来,养殖扇贝陆续爆发的大规模死亡,不但造成了巨大的经济损失,而且直接威胁到现有产业的生存和发展。引起扇贝大规模死亡原因是多方面的,其主要原因是养殖环境恶化、扇贝种质衰退和抗病力下降。因此,深入研究扇贝免疫防御机制,探讨提高机体抗病力的有效途径和方法,改良种质和培育抗病品系,无疑是解决目前困扰扇贝养殖业健康可持续发展的必经之路。 Toll样受体(TLRs)家族是新近发现的模式识别受体(PRRs),参与识别病原体相关的分子模式(PAMPs),在天然免疫系统中起着非常重要的作用。哺乳动物中Toll样受体信号通路还参与诱导树枝状细胞成熟、参与免疫耐受、参与凋亡发生发展、介导非感染性因素的识别等,被视为联系天然免疫和获得性免疫的桥梁。同时果蝇的Toll信号通路也是不具备获得性免疫的果蝇赖以抵御病毒、细菌和真菌感染,介导天然免疫反应的重要信号通路。 本研究采用大规模EST测序方法,结合Genome Walker库的构建和cDNA末端快速扩增技术,从栉孔扇贝克隆得到CfToll-1、CfMyd88、CfTRAF6和CfCactus这四个Toll样受体信号通路基因的全长cDNA,同时用荧光实时定量PCR技术检测了这些基因的组织分布及在脂多糖(LPS)和肽聚糖(PGN)刺激下的表达规律。 栉孔扇贝Toll样受体(CfToll-1)的cDNA序列全长4308 bp,包含5'非翻译区(UTR)211 bp,3597 bp的开放阅读框,500 bp的3'UTR,最后为18个腺嘌呤的ploy A尾巴。开放阅读框编码1198个氨基酸的多肽,该多肽的估计分子量为137.41kd,估计的等电点为5.62,该多肽有信号肽,具有一个预测的跨膜区,因此是一种跨膜蛋白。经BLAST比对,CfToll-1基因与节肢动物多种Toll蛋白高度的相似性。SMART(Simple Modular Architecture Research Tool)软件分析,CfToll-1包含典型的Toll样受体的结构:富含亮氨酸的重复序列的胞外区(leucine-richrepeats, LRR),一段跨膜结构域,以及胞内区的TIR结构域(Toll/IL-1 receptorhomologous region)。利用Real-time RT-PCR发现CfToll-1mRNA在扇贝体内普遍存在于血细胞、肌肉、外套膜、心、性腺和鳃组织中。利用体外培养的原代血细
【学位授予单位】:中国科学院研究生院(海洋研究所)
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S917.4

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