收藏本站
《中国科学院研究生院(海洋研究所)》 2008年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

文蛤(Meretrix meretrix)幼虫生长发育相关基因的克隆和功能分析

王晓梅  
【摘要】: 贝类养殖是我国海水养殖业中最重要的组成部分之一。贝类人工大规模养殖中的关键环节是种苗的人工繁育,早期幼虫能否正常生长发育,对幼虫变态和变态后生长率及成活率有很大的影响,直接关系到生产产量和经济效益,所以,了解幼虫发育机制对于生产实践具有重要的指导意义。 文蛤(Meretrix meretrix)是一种在东亚各国沿海和滩涂地区广泛分布的双壳贝类,是我国一种重要的经济品种。本论文以文蛤幼虫为研究对象,分别对文蛤幼虫发育过程中贝壳形成相关的铁蛋白(MmeFer)、营养及变态相关的组织蛋白酶B(MmeCB)及变态过程中细胞凋亡相关的caspase三个基因进行了克隆,分析了基因及编码蛋白在担轮幼虫期(L1)、D形幼虫期(L2)、壳顶幼虫期(L3)和稚贝期(L4)的时空表达特征,解析了其可能的功能,并研究了相应酶类的特异性抑制剂作用对幼虫发育过程的影响,进行了目标蛋白的功能验证,详述如下: 研究结果显示,在文蛤胚胎发育到原肠胚时放入不含铁离子的人工海水中培养,发育成无壳的畸形,随着人工海水中铁离子添加浓度的升高,幼虫长出壳状组织接近正常状态;而发育到L1期幼虫放入不含铁离子的人工海水中培养却可以发育出正常的壳,推测铁和铁代谢相关蛋白在幼虫贝壳初始形成有重要的作用。根据构建的文蛤幼虫cDNA文库中提供的序列信息,从文蛤中克隆了与铁离子代谢密切相关的铁蛋白(MmeFer)的全长cDNA序列;通过Real time PCR发现,MmeFer mRNA的表达量在贝壳形成前后有明显改变;整体原位杂交结果显示MmeFer mRNA在L1期的表达部位刚好是贝壳生成的起始部位,推断文蛤铁蛋白与文蛤幼虫贝壳初始形成密切相关。 利用文蛤幼虫cDNA文库中的EST信息在幼虫中克隆到文蛤组织蛋白酶B(MmeCB)全长cDNA序列;通过整体原位杂交分析发现MmeCB mRNA在L2至L4期幼虫的消化腺部位表达,而且在L2期的幼虫表皮也有表达,说明MmeCB可能和幼虫消化相关,而且可能参与幼虫从表皮摄取营养的过程。利用MmeCB特异性抑制剂(CA074Me)处理饥饿幼虫,发现其生长受到明显抑制,验证了MmeCB参与幼虫表皮营养代谢的推论。利用免疫组织化学技术,研究了MmeCB蛋白在文蛤幼虫中的时空分布,发现其在L2期幼虫表面和胃部有阳性信号,而在L3期,MmeCB在幼虫面盘基部有强烈的表达,提示MmeCB在文蛤幼虫中不仅起到营养的作用,而且可能和幼虫附着变态有关。利用CA074Me分别处理文蛤胚胎和变态期幼虫,发现抑制MmeCB的活性对胚胎发育和幼虫变态都有显著影响。研究结果提示MmeCB在幼虫发育各阶段均具有重要的生物学功能。 根据caspase在不同物种中的保守区域设计简并引物,在文蛤幼虫中扩增到cDNA序列片段;检测有活性的caspase在文蛤幼虫各发育时期的分布部位,发现其在L1至L3期幼虫中都有分布,说明整个幼虫形态变化过程中都有caspase的参与;细胞凋亡检测结果显示,幼虫主要发生细胞凋亡的部位在L3期幼虫的面盘,即变态过程中要退化的器官,说明细胞凋亡可能是文蛤幼虫变态过程中面盘退化的主要机制;用caspase特异性抑制剂处理变态前幼虫,发现幼虫变态率下降,初步验证了caspase在文蛤幼虫变态过程中的作用。 通过对上述三种基因的研究,分别探讨了文蛤幼虫发育阶段中的几个主要事件(L1期到L2期的贝壳形成、L2到L3期的幼虫营养摄食及L3到L4期的附着变态)相关的基因及其功能,为研究贝类生长发育调控的分子机理提供了新的线索。
【学位授予单位】:中国科学院研究生院(海洋研究所)
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:S917.4

手机知网App
【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 周小龙;郑云云;董迎辉;林志华;;海洋贝类功能基因的研究进展[J];海洋科学;2012年12期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 游雅楠;67kD层粘连蛋白受体及其调控通路在文蛤(Meretrix meretrix)细胞生长和幼虫发育中的功能解析[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 陈宏健;CRIP在文蛤与方形网纹溞发育过程中的功能[D];河北大学;2013年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘相全,方建光,包振民,王如才;中国沿海帘蛤科贝类主要经济种育苗与养殖技术研究进展[J];动物学杂志;2003年04期
2 徐夏莲,赵小凡,王金星;棉铃虫组织蛋白酶B组织分布与合成部位的研究[J];动物学研究;2001年03期
3 易铁男,周云峰,伍钢;Caspase家族与细胞凋亡的研究进展[J];国外医学(肿瘤学分册);2001年01期
4 卢士英,任洪林,柳增善,赵广英,华育平;组织蛋白酶B研究进展[J];河北师范大学学报;2004年03期
5 杨军,王宇婧,张曼平;催化阴极溶出伏安法测定海水中的铁及实验条件的优化[J];海洋技术;2001年03期
6 张涛;海洋无脊椎动物幼虫附着变态研究进展 Ⅰ.影响因子[J];海洋科学;2000年01期
7 张涛;海洋无脊椎动物幼虫附着变态研究进展 II:附着变态模型及人工诱导物在经济贝类苗种生产中的应用[J];海洋科学;2000年02期
8 李莉;Caspase与细胞凋亡[J];辽宁医学杂志;2004年03期
9 ;Caspase Family Proteases and Apoptosis[J];Acta Biochimica et Biophysica Sinica;2005年11期
10 纪玉强,谢明;细胞凋亡的形态学变化过程及相关的分子调节研究进展[J];微生物学免疫学进展;2003年03期
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 李云;IGFBP-3在斑马鱼胚胎发育中的功能[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2005年
2 张继泉;中国明对虾免疫等相关基因的克隆、重组表达与功能分析[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2005年
3 王国栋;调控文蛤幼虫变态的肾上腺素能受体类型及幼虫发育中神经和肌肉的变化[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2006年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李一宁;梁艳;黄倢;董双林;;对虾白斑综合征病毒分子致病机制的研究进展[J];安徽农业科学;2010年07期
2 秦艳杰;马俊峰;李霞;张慧敏;;抑制性消减杂交技术在水产无脊椎动物中的应用[J];安徽农业科学;2012年09期
3 李祥春;张开光;;组织蛋白酶B与胃癌研究进展[J];安徽医药;2010年09期
4 李子俊,林秋雄,王启仪,林华欢,骆新兰,詹德娟;胃癌及癌前病变细胞增殖和凋亡与bcl-2/bax表达的关系[J];癌症;2000年11期
5 施祥元;沈伟良;尤仲杰;;不同藻类对毛蚶浮游幼虫附着的影响[J];现代农业科技;2007年10期
6 谭围;陈傅晓;蒲利云;曾关琼;;我国常见蚶类的人工育苗与养殖技术研究进展[J];现代农业科技;2012年08期
7 廖翔华;;寄生在鲤鱼及草(鲩)鱼的鱊头槽绦虫的多样性(英文)[J];动物学报;2007年03期
8 闻海波;许洪洪;曹哲明;顾若波;徐钢春;华丹;徐跑;;孕育对褶纹冠蚌滤食率的影响及鳃微结构变化[J];动物学杂志;2011年04期
9 李威;易银;吴昊;张彤;;Ⅲ型干扰素信号通路诱导肺癌细胞凋亡的机制研究[J];北京医学;2011年12期
10 赵丽晶;许多;梁作文;程宏;郭亚雄;李德隆;韩向北;赵丽娟;董妍;;20(s)-原人参二醇诱导体外培养Siha细胞凋亡的作用[J];吉林大学学报(医学版);2010年02期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 祁昕;刘彦斌;田树军;;组织蛋白酶对羊卵母细胞发育能力影响的研究进展[A];中国畜牧兽医学会养羊学分会2012年全国养羊生产与学术研讨会议论文集[C];2012年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孟宪红;中国对虾“黄海2号”对WSSV的抗病性分析[D];中国海洋大学;2010年
2 赖晓芳;中国对虾应答WSSV侵染相关基因的研究[D];中国海洋大学;2010年
3 金雷;MiRNA-149~*调控黑色素瘤应对内质网压力的研究[D];中国科学技术大学;2010年
4 梁焯;Harpin蛋白纳米药物药效研究及Pen-2 DNA纳米药物抗WSSV研究[D];武汉大学;2010年
5 刘爱群;凋亡调控相关基因FAF1、Bcl-2和Survivin在Hpylori感染胃癌变过程中的表达机制初探及临床意义[D];广西医科大学;2011年
6 罗展;凡纳滨对虾两种C-型凝集素的基因克隆和功能研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2010年
7 杨长福;莪术油干预肺纤维化上皮细胞转分化的实验研究[D];北京中医药大学;2011年
8 曹长姝;中药臭灵丹中HTMF体外抗肿瘤机制研究[D];暨南大学;2011年
9 敦洁宁;5-氟尿嘧啶联合白藜芦醇的抗肿瘤作用研究[D];河北医科大学;2011年
10 郭启帅;PeroxiredoxinⅠ对乳腺癌细胞放射敏感性的影响及其作用机制的实验研究[D];重庆医科大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 高景蓬;克仑特罗对COPD大鼠膈肌细胞凋亡影响的实验研究[D];南京医科大学;2009年
2 周翌婧;硒通过线粒体途径对镉诱导的LLC-PK1细胞凋亡影响的研究[D];南京医科大学;2009年
3 李静;Beclin1、Caspase3在宫颈鳞癌患者新辅助化疗前后癌组织中的表达及其意义[D];郑州大学;2010年
4 史志如;汉黄芩素对人乳腺癌细胞胰岛素样生长因子-1的影响[D];辽宁师范大学;2010年
5 张晨晨;低渗诱导栉孔扇贝三倍体及与其它方法的比较[D];中国海洋大学;2010年
6 李一宁;对虾白斑综合症病毒(WSSV)VP36A的原核表达及其功能的初步研究[D];中国海洋大学;2009年
7 陈莉;Cpd5对人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制和凋亡诱导作用及其作用机制的研究[D];滨州医学院;2010年
8 张江锋;大鼠肢体缺血再灌注不同时段相关炎性介质的表达[D];广西医科大学;2011年
9 支晓雁;瑞芬太尼后处理对大鼠肾缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响[D];山西医科大学;2011年
10 张释双;粒细胞集落刺激因子对大鼠脑缺血再灌注损伤Caspase-3与细胞色素C含量的影响[D];山西医科大学;2011年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孟琼;邓道贵;;枝角类休眠卵形成和萌发的研究进展[J];动物学杂志;2008年03期
2 袁一鸣;汪桂玲;李家乐;;三角帆蚌金属硫蛋白基因的克隆及序列分析[J];动物学杂志;2009年05期
3 刘卫东;赫崇波;刘彤;鲍相渤;虞星炬;;虾夷扇贝肌动蛋白基因cDNA序列克隆与分析[J];水产科学;2008年10期
4 庄德辉;重金属对方形网纹溞的毒性研究[J];重庆环境科学;1996年01期
5 杨坤;张健;蒋华良;朱维良;王希诚;;钙调蛋白构象变化路径[J];大连理工大学学报;2009年04期
6 唐仁生;夏建红;王玉梅;喻达辉;龚世园;;大珠母贝(Pinctada maxima)金属硫蛋白cDNA克隆与序列特征分析[J];福建水产;2009年01期
7 谷文萍;热休克蛋白70研究进展[J];国外医学.神经病学神经外科学分册;1999年02期
8 陈大鹏,沈怀舜,丁亚平,杨家新,许璞;文蛤、青蛤和四角蛤蜊的随机扩增多态性DNA(RAPD)的比较分析[J];海洋通报;2004年06期
9 王晓梅;刘保忠;相建海;;文蛤(Meretrix meretrix)幼虫发育过程中细胞凋亡和Caspase功能分析[J];海洋与湖沼;2009年02期
10 贺静静;李晔;李太武;苏秀榕;王孟前;李松伟;周军;马斌;李强芳;;泥蚶(Tegillarca granosa)cDNA文库的构建及铁结合蛋白基因(Ferritin)序列分析[J];海洋与湖沼;2009年03期
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 本报记者 廖洋;[N];科学时报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 吴成龙;皱纹盘鲍抗氧化基因的克隆及其在营养调控下表达的研究[D];中国海洋大学;2010年
2 曲凌云;三种养殖扇贝热休克蛋白HSP70在逆境因子下的表达和相关基因的克隆[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2004年
3 马洪明;栉孔扇贝血细胞形态学研究和抗病功能基因的克隆[D];中国海洋大学;2004年
4 苏建国;栉孔扇贝两种模式识别受体基因的克隆与表达的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2005年
5 胡晓丽;高温胁迫和鳗弧菌感染对栉孔扇贝基因表达影响的分析及相关基因的克隆与表达[D];中国海洋大学;2005年
6 朱玲;扇贝丝氨酸蛋白酶及其抑制剂基因的克隆与表达[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2006年
7 赵建民;扇贝大防御素和G型溶菌酶的基因克隆与重组表达[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2006年
8 倪多娇;栉孔扇贝抗氧化酶基因的克隆与表达分析[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2007年
9 李成华;栉孔扇贝核心组蛋白的基因结构及H2A抗菌活性的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2007年
10 邵明瑜;栉孔扇贝生殖相关基因DEAD-box家族和boule的cDNA克隆及其发育表达图式[D];中国海洋大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 胥炜;海湾扇贝和栉孔扇贝EST分析及C型凝集素基因的克隆与分析[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2004年
2 邹慧斌;栉孔扇贝和海湾扇贝G型溶菌酶基因及栉孔扇贝硒结合蛋白基因的克隆和表达研究[D];中国海洋大学;2005年
3 刘维青;海湾扇贝金属硫蛋白cDNA序列克隆及其在镉和鳗弧菌诱导下的表达研究[D];中国海洋大学;2005年
4 孔鹏飞;海湾扇贝补体样成分AiC1qDC-1基因克隆及其功能的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2010年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 康亚兰;裴瑾;蔡文龙;刘薇;罗静;吴清华;;药用植物黄酮类化合物代谢合成途径及相关功能基因的研究进展[J];中草药;2014年09期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 赵红艳;马氏珠母贝数量性状与微卫星的关联分析[D];广东海洋大学;2013年
2 周小龙;泥蚶微卫星分子标记的开发与应用及生长相关基因HDAC1的克隆[D];上海海洋大学;2013年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵小凡,高橋進;家蚕Bombyx mori酸性半胱氨酸蛋白酶的组织分布及合成部位研究[J];动物学报;1994年01期
2 华益民,林浩然;草鱼IGF-ⅠcDNA的克隆和在原核生物中的表达[J];动物学报;2001年03期
3 宋霞,周开亚;甲壳类的眼柄神经激素[J];动物学杂志;2000年04期
4 陈冲,隋锡林,陈远,赵国成;文蛤浮游幼虫期饵料的研究[J];水产科学;1992年03期
5 陈冲,陈远,隋锡林;文蛤双重底网箱育苗试验[J];水产科学;1993年10期
6 胡振德;菲律宾蛤仔土池人工育苗试验报告[J];水产科学;1996年02期
7 王子臣,毛连菊,陈来钊,常亚青,王世震,史宗元,李豫红;温度休克诱导栉孔扇贝和虾夷扇贝三倍体的初步研究[J];大连水产学院学报;1990年Z1期
8 陈远,陈冲,王笑月,苏鹤声,隋锡林;文蛤工厂化人工育苗技术研究[J];大连水产学院学报;1998年02期
9 林君卓,许振祖;温度和盐度对文蛤幼体生长发育的影响[J];福建水产;1997年01期
10 唐启升;中国海洋渔业可持续发展及其高技术需求[J];中国工程科学;2001年02期
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 郭振宇;中国对虾免疫相关分子抗菌肽和热休克蛋白的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2004年
2 李云;IGFBP-3在斑马鱼胚胎发育中的功能[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2005年
3 姚翠鸾;免疫刺激后中国明对虾血液抗菌力应答及两种免疫相关因子LYZ和AK的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2005年
4 董波;中国明对虾和文蛤EST分析及细胞黏附蛋白基因的克隆和表达谱[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2005年
5 柳峰松;中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)抗菌因子及模式识别蛋白的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2005年
6 王兵;中国对虾免疫相关基因和性别相关核酸片段研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2003年
【相似文献】
中国重要会议论文全文数据库 前4条
1 Aimin Wang;Yan Wang;Zhifeng Gu;Sifa Li;Yaohua Shi;Ximing Guo;李宏俊;赫崇波;;文蛤(Meretrix meretrix)cDNA文库的构建及ESTs序列的初步分析[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
2 王鸿霞;张素萍;刘保忠;;文蛤属线粒体全基因组序列特征分析[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
3 徐晓东;吴相云;喻子牛;;真曲巴菲蛤(Paphia euglypta)线粒体基因组全序列测定及比较基因组学研究[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
4 梁建安;卓么措;李兰涛;王康英;许振勇;;湛江港利马原甲藻对多种鱼虾贝的毒性研究[A];中国南方十六省(市、区)水产学会渔业学术论坛第二十六次学术交流大会论文集(下册)[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 游雅楠;67kD层粘连蛋白受体及其调控通路在文蛤(Meretrix meretrix)细胞生长和幼虫发育中的功能解析[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2013年
2 陈军;帘蛤科贝类分子系统学研究[D];中国海洋大学;2012年
3 王清;几种重金属和有机污染物对文蛤Meretrxi meretrix生态毒理效应的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2010年
4 万夕和;文蛤“菊花瘟”在江苏地区的流行病学、病理学以及病原学研究[D];南京农业大学;2008年
5 岳欣;文蛤弧菌病的病原分析、免疫应答及抗性选育研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
6 卢霞;分子标记应用于文蛤遗传评价、图谱构建及QTL筛选的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 朱东丽;文蛤(Meretrix meretrix)不同壳色花纹品系的分子标记及DNA甲基化分析[D];中国海洋大学;2011年
2 丁桂森;文蛤(Meretrix Lusoria)多肽海鲜调味料的研究[D];南京农业大学;2009年
3 王健;文蛤线粒体基因组序列测定及进化分析[D];辽宁师范大学;2010年
4 王超;文蛤(Meretrix meretrix)选择群体生长、抗性差异的初步解析[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
5 陈金凤;氨氮对文蛤能量收支的影响及其毒理效应的研究[D];苏州大学;2010年
6 万宇;江苏南通文蛤产业结构与特征初步研究[D];中国海洋大学;2013年
7 刘泽浩;中国沿海常见帘蛤科贝类的分类地位研究[D];青岛理工大学;2010年
8 刘兆胜;真蛸基础生物学和繁育技术研究[D];中国海洋大学;2013年
9 李志茹;P-糖蛋白在毛蚶镉代谢中的作用研究[D];中国海洋大学;2011年
10 郑培;文蛤三个选育世代的多样性研究[D];上海海洋大学;2013年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026