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《中国科学院研究生院(上海生命科学研究院)》 2003年
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丙型肝炎病毒高变区1高反应性多肽筛选、表达及其特性研究

张欣欣  
【摘要】: 高变区1(HVR1)是位于丙型肝炎病毒(HCV)被膜蛋白E2氨基端的高度异质性的一段序列,被认为是宿主体液免疫中和抗体的重要靶位,但其株特异性可导致部分病毒逃避宿主的免疫识别和感染的持续。虽然如此,HVR1序列中存在较保守的位点,通过合适的HVR1免疫程序,仍可能诱生出保护性抗体。 本研究对来自中国不同地区的HCV HVR1进行了序列特性分析,在综合考虑地域因素和基因型的差别、亲水性和免疫原性的基础上,首先在大肠杆菌中表达了四种DHFR-HVR1融合蛋白,检测了它们与HCV感染者血清反应性,其中SH1b的反应率最高,为66.67%;初步分析提示患者免疫反应的强度可能与干扰素疗效有关。所得融合蛋白纯化后免疫家兔获得了相应的抗体。将其中三个HVR1片段分别连接至乙型肝炎病毒表面抗原片段的羧端,表达了HBs-HVR1融合蛋白。 为进一步提高HVR1序列的交叉反应性,采用DNA shuffling的方法体外重组31株从丙肝患者血清中获得的HVR1 cDNA自然序列,构建HVR1模拟序列噬菌体展示文库,通过抗HVR1多克隆抗体的亲和筛选, 其反应性从46.7%-66.7% 提高到 53.3%-80%,二株反应性最高的HVR1模拟肽为13号(80%)和23号(76.7%),提示它们可能是重要的免疫原性肽段,其序列与共识序列高度同源可能是导致其广泛反应性的原因。对模拟肽的免疫原性及保护性将在今后作进一步的研究。 总之,本研究在原核及真核系统中成功地表达了所选择的HVR1序列,并对其部分特性进行了分析;同时采用DNA shuffling和噬菌体展示技术,构建了HVR1模拟肽库,筛选得到了高反应性模拟肽。与目前国际上广泛采用的合成肽研究方式相比,费用便宜,变异类型覆盖面广,交叉反应性高,可望成为抗HCV感染的候选免疫原。
【学位授予单位】:中国科学院研究生院(上海生命科学研究院)
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R346

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