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《中国科学院研究生院(上海生命科学研究院)》 2005年
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转录因子CaFlo8在白念珠菌形态发生和毒性表现中的功能作用

曹芳  
【摘要】: 白念珠菌的形态转换是其致病性最重要的决定因素之一,这种形态变化受各种外界信号和细胞内信号转导途径的调控。转录因子Flo8在酿酒酵母形态发生中起关键作用,并受cAMP/PKA信号转导途径调控。为了证明白念珠菌中是否也存在类似的调控机制,我们通过功能互补实验,将白念珠菌基因组文库导入酿酒酵母单倍体flo8缺失株中,筛选能够互补或校正其侵入生长缺陷的基因,分离鉴定到8个新基因,包括FLO8的同源基因CaFLO8和PPE1的同源基因CaPPE1。 CaFlo8与Flo8蛋白在全序列比较时同源性较低,但是N端的部分区域CaFlo8(30-92aa)与Flo8(72-154aa)高度同源。CaFlo8能够回复flo8缺失株的侵入和假菌丝生长缺陷,并能部分互补flo8缺失株的biofilm形成缺陷。通过序列比较和功能互补实验,我们确定了FLO8的同源基因CaFLO8。CaFlo8在酿酒酵母中具有转录激活作用,激活菌丝生长和侵入生长,这种激活作用绕过MAPK途径。利用lacZ作为报道基因分析CaFlo8的转录激活功能,发现CaFlo8蛋白N端的LUFS结构域和C端区域对其功能的发挥都有重要的影响,其中C端区域在转录激活过程中起主要作用。 CaFLO8基因的敲除对白念珠菌的生长速度影响不大,但是对菌丝发育的影响很大,Caflo8缺失株在菌丝诱导的液体培养基中和固体培养基中都不能形成菌丝。Northern结果表明CaFlo8对菌丝特异基因的表达具有重要的调控作用,Caflo8缺失株中多个菌丝特异基因的表达和毒性相关基因的表达受阻。这种影响表现为剂量依赖,一个拷贝CaFLO8基因的敲除就能够影响表型的变化,减弱菌丝的形成和菌丝特异基因的表达。在小鼠系统感染试验中,Caflo8缺失株几乎没有毒性,
【学位授予单位】:中国科学院研究生院(上海生命科学研究院)
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q934;Q935

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