收藏本站
《中国科学院研究生院(昆明动物研究所)》 2002年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

猕猴胚胎干细胞的分离、鉴定、培养及应用研究

马岚  
【摘要】: 本论文以猕猴胚胎干细胞为主要研究对象,在猕猴胚胎干细胞的分离、培养及鉴定方面、猕猴胚胎干细胞体外持续培养体系的建立及优化方面、应用猕猴胚胎干细胞为细胞模型研究LIF对介导胚胎着床的滋养层细胞分化的影响效应方面、以及应用猕猴胚胎干细胞为细胞模型研究三种光敏药物的光敏毒性以及光敏生物活性方面进行了研究。研究主要获得了以下结果: 1、通过猕猴卵母细胞体外成熟培养、体外受精和早期胚胎体外培养技术,由4只超排的成年猕猴中共取得92个处于GV期的猕猴卵母细胞,选取其中的22个于HECM-10培养体系培养后,获得了6个高质量的猕猴囊胚,由此自然孵出的囊胚中分离得到6个内细胞团,并由此最终获得1株具有高核仁/胞质比,具有明显的核仁,集落边界清楚,其内的细胞明晰的,具有胚胎干细胞特征的猕猴类ES细胞——RS5细胞。经5个月的连续传代后,RS5细胞仍保持了正常二倍体的核型,其染色体数目与正常猕猴的一样,均为42条。碱性磷酸酶组织化学染色,结果表明为阳性,说明此细胞为未分化态的原始类胚胎干细胞。由胚胎干细胞多能性分化的初步研究结果来看,在高密度和解除抑止的状态下,此RS5细胞是能进一步发展为多种分化细胞的。 2、建立了猕猴胚胎干细胞RS366.4体外持续培养、扩增及冻存培养体系。 3、白血病抑制因子(LIF)在胚胎着床中起着重要作用??LIF可通过参与人滋养层细胞分化而介导胚泡着床。已有的关于LIF与滋养层细胞分化间关系的研究结果是相互矛盾的。为避免由早期胚胎标本或胎盘来源的细胞滋养层细胞模型的不足,本实验选用由猕猴RS366.4 ES细胞来源的早期分化滋养层细胞为模型进行研究。细胞流式仪结果表明低浓度的LIF可促进绒毛合胞体滋养层的分化,高浓度的LIF可促进绒毛外侵入性滋养层细胞的分化。细胞免疫组化结果则显示经LIF处理后,侵入性绒毛滋养层细胞的标志物之一?? Fibronectin呈阳性。 4、北醌化合物为性能优良的光敏剂。本研究首次以R366.4 ES细胞为模型,测试了EA的光敏毒性,并首次报道了EA的光敏生物活性。经不同光照时间处理后,低浓度的光敏化的EA对R366.4细胞均无细胞毒性作用。在此浓度范围内,对于Hce-8693细胞,EA,HA及HB则均以浓度依赖的方式引起其细胞凋亡,其光敏抑制效应顺序为HA EA HB。对于B16细胞,EA也以浓度依赖的方式引起其细胞凋亡。这些结果表明EA、HA及HB均有较显著的光敏抑癌生物活性。
【学位授予单位】:中国科学院研究生院(昆明动物研究所)
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:Q813

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 曹槐,李聪,刘世熙,邵丹,陈远腾,汪汉卿;痂囊腔菌素A的结构[J];化学学报;2000年07期
2 蒋丽金;竹红菌素的结构、性质、光化学反应及反应机制(Ⅰ)——竹红菌素的结构和性质[J];科学通报;1990年21期
3 杜忠伟,丛笑倩,姚錱;维持Oct-4基因表达对小鼠胚胎干细胞分化的影响[J];科学通报;2001年09期
4 闫建设,郭椋昊,刘疆,王红;孕酮对人早孕子宫蜕膜细胞活性肾素分泌的调节[J];生理学报;1999年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 毕韵梅,赵黔榕,陈远腾,谢金伦,汪汉卿;头孢霉AL031真菌氨基酸和无机元素分析[J];氨基酸和生物资源;2001年01期
2 王庆彬,焦丽红,闫建设,刘疆,王红;血管紧张素在人子宫蜕膜化中的作用[J];动物学报;2002年04期
3 夏盛钦,陈景荣,王雪松,张宝文;一种新型葡萄糖基化竹红菌素的合成和ESR研究[J];感光科学与光化学;2004年05期
4 李红梅;崔德健;佟欣;高亚兵;崔雪梅;王德文;梁延杰;;基质金属蛋白酶对大鼠慢性阻塞性肺病模型气道细胞外基质重塑的作用及影响因素[J];感染.炎症.修复;2002年02期
5 张自禄,胡鑫尧,卢为琴,周群,郁鉴源,胡义镇;竹红菌甲乙素的FT-Raman光谱[J];光散射学报;1997年Z1期
6 庞战军;滋养层细胞侵入调控研究常用的细胞株与模型[J];国外医学.妇产科学分册;2001年06期
7 高博文;禹继国;高仲合;陈平;汤国庆;母国光;;PDT光敏剂HA在不同液相体系下的光谱特性研究[J];光学学报;2006年06期
8 高博文;孟婧;方芸;王文国;汤国庆;;基于三维简并四波混频的PDT光敏剂HA瞬态光栅特性研究[J];光学学报;2007年06期
9 张琨;刘越峰;王芳芳;闫永丽;郭立俊;;竹红菌甲素(HA)线性光学性质及双光子吸收特性研究[J];河南大学学报(自然科学版);2010年06期
10 冷启新,李瑞祥,刘执玉;MMP-9在THP-1分化过程中的表达及调节[J];华西医科大学学报;2000年04期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 张自禄;胡鑫尧;孙素琴;卢为琴;;竹红菌乙素的FT-IR与FT-Raman光谱[A];分子光谱学进展(Ⅸ)[C];1996年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 苏宇杰;竹红菌素的特性及应用研究[D];江南大学;2011年
2 许川山;BPD-MA对人膀胱癌细胞株BIU-87光动力抑制作用及其机制研究[D];第三军医大学;2002年
3 董晓;猪胚胎干细胞(EG)建系影响因素的研究[D];中国农业大学;2003年
4 杨奇;Aroclor 1254对3种成纤维细胞的毒性及绵羊ES细胞的分离[D];西北农林科技大学;2003年
5 胡炳成;吡咯烷硫酮衍生物的合成及结构表征[D];南京理工大学;2004年
6 雷霆;胚胎植入的调节及其体外模型的构建[D];华中农业大学;2005年
7 田海滨;小鼠和山羊胚胎干细胞建系及其分化为神经元细胞的基础研究[D];山东大学;2005年
8 刘子文;竹红菌素衍生物光动力作用诱导人胰腺癌细胞Capan-1凋亡机理的实验研究[D];中国协和医科大学;2003年
9 宋坤;光敏剂—纳米粒载体系统在卵巢癌光动力学治疗中的实验研究[D];山东大学;2006年
10 李亚清;肺泡巨噬细胞源性基质金属蛋白酶在慢性阻塞性肺疾病发病机制中的作用的研究[D];华中科技大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王薇;水溶性竹红菌素/二氧化钛给药体系的构建及其性质研究[D];南京师范大学;2011年
2 殷红福;光敏化合物竹红菌素抑菌杀虫作用研究[D];浙江农林大学;2011年
3 林海萍;竹黄菌(Shiraia bambusicola)生物学性状及其人工培养技术研究[D];浙江大学;2002年
4 张曦倩;蜕膜及其它因子对滋养细胞侵入的影响及其与MAPK的关系[D];第一军医大学;2002年
5 尚立群;竹红菌乙素—光动力疗法对胸部常见肿瘤细胞杀伤效应的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2004年
6 卢明锋;一株苝醌类光敏剂产生菌的rRNA基因ITS测序分析及液体深层发酵工艺研究[D];四川农业大学;2004年
7 张晓星;竹红菌素胺基衍生物的合成及其光动力作用的研究[D];哈尔滨工程大学;2004年
8 马晓梅;正常妊娠和重度妊高征胎盘中MMP-9、TIMP-1、VEGF的表达及意义[D];新疆医科大学;2005年
9 史玉凤;肺泡蛋白沉积症9例报告[D];浙江大学;2006年
10 吴晓红;光疗药物—竹红菌甲素与血红素类蛋白质的相互作用研究[D];南京师范大学;2006年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘景瑶,张曼华,安静宜;竹红菌甲素的光物理——吸收和发射光谱的研究[J];感光科学与光化学;1986年01期
2 刘云清;;苝醌类色素——竹黄菌素A用作分析试剂 1.用作酸-碱指示剂[J];化学试剂;1985年04期
3 安静仪,张曼华,吴国永,刘景瑶,马桂珍,蒋丽金;竹红菌甲素的光化学——甲素敏化的烯烃光氧化反应的研究——甲素产生~1O_2的作用[J];中国科学(B辑 化学 生物学 农学 医学 地学);1985年11期
4 张志义,臧伦义,徐国瑞,陶能兵,王大辉;竹红菌甲素光敏作用原初反应的特征[J];中国科学(B辑 化学 生命科学 地学);1989年04期
5 梁丽,竺廼珏,蒋丽金;竹红菌甲素光氧化物的晶体结构及其光氧化反应机制的探讨[J];中国科学(B辑 化学 生命科学 地学);1989年12期
6 张曼华,安静仪,倪志杰,蒋丽金;竹红菌甲素的光化学——竹红菌甲素自敏光氧化反应的研究[J];科学通报;1984年18期
7 梁丽,竺迺珏,张曼华;竹红菌乙素晶体和分子结构[J];科学通报;1987年01期
8 赵开弘,蒋丽金,孙贤育;溶液中竹红菌甲素的结构异构化[J];科学通报;1988年22期
9 第五振军,蒋丽金,张曼华,马俊宁,王志军;竹红菌甲素的立体化学[J];科学通报;1989年14期
10 赵开弘,蒋丽金;竹红菌甲素、乙素及其衍生物的自敏光氧化[J];科学通报;1989年17期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郭义峰!200003,闵志廉!200003;克隆技术与组织器官移植[J];中华泌尿外科杂志;2001年03期
2 王国云,孔北华,李栋,张辉,白增亮;昆明鼠胚胎干细胞的分离培养与鉴定[J];山东大学学报(理学版);2004年03期
3 赵明,任彩萍;胚胎干细胞诱导分化的研究进展[J];生命科学;2005年01期
4 申宁馨;;克隆细胞——帕金森病治疗新武器[J];今日科苑;2008年09期
5 姚;胚胎干细胞的特性、体外分化及其应用前景[J];上海免疫学杂志;1999年03期
6 ;德专家告诫慎用胚胎干细胞移植法治疗脑疾[J];国外科技动态;2002年07期
7 沈干,丛笑倩,刘晓音,汪铮,曹谊林;胚胎干细胞向神经细胞诱导分化的研究[J];国外医学.生物医学工程分册;2002年04期
8 李相运;胚胎干细胞的体外诱导分化[J];家畜生态;2002年04期
9 郭玉山 ,赵长根;德国允许开展胚胎干细胞研究[J];全球科技经济瞭望;2002年06期
10 钱坤;陈红;张苏明;朱桂金;;人成纤维细胞对人胚胎干细胞生长的支持作用[J];华中科技大学学报(医学版);2006年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 秦茂林;蔡文琴;张吉强;李成仁;李巍;;雌二醇对胚胎干细胞神经定向分化诱导的影响[A];中国解剖学会第十一届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文汇编[C];2009年
2 徐小明;窦忠英;华进联;葛秀国;;免疫外科法分离克隆BALB/c小鼠胚胎干细胞[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
3 蒋晖;瞿东滨;金大地;鞠躬;;新型神经营养因子TAT-BDNF促进胚胎干细胞的神经元性分化[A];第一届全国脊髓损伤治疗与康复研讨会暨中国康复医学会脊柱脊髓损伤专业委员会脊髓损伤与康复学组成立会论文汇编[C];2009年
4 于洲;徐海滨;;应用胚胎干细胞实验模型体系对异硫氰酸盐发育毒性的研究[A];2010年全国药物毒理学学术会议论文集[C];2010年
5 刘平;关云谦;邹春林;张愚;陈彪;刘焯霖;;胚胎干细胞在体内外诱导分化成为多巴胺能神经的初步研究[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年
6 隋婧;姜方旭;施秉银;;胚胎干细胞定向分化为胰岛祖细胞的基因表达谱分析[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年
7 胡敏华;区颖蕾;李莉;郭欣政;张守全;;胚胎干细胞饲养层的优化及影响内细胞团贴壁率的探讨[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
8 马育芳;杨阳;李燕;王少华;赵蕊;李宁;;猪胚胎干细胞多能性因子Nanog对胚胎发育的影响[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
9 曹楠;杨黄恬;;大鼠胚胎干细胞向心肌细胞体外分化的研究[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年
10 田孝祥;韩雅玲;康建;徐凯;闫承慧;;利用胚胎干细胞建立贴壁制备胚胎小体的新方法[A];中华医学会心血管病学分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张树庸 赵贵英;干细胞研究的突破[N];人民日报;2009年
2 记者 刘霞;英用胚胎干细胞制造出红血球[N];科技日报;2010年
3 孙国根;复旦大学成功提取首个大鼠胚胎干细胞[N];中国医药报;2009年
4 本报首席记者 任荃;第二颗“全能种子”会不会抢先“发芽”[N];文汇报;2009年
5 刘霞;美用胚胎干细胞制造出血小板[N];科技日报;2011年
6 记者 郑晓春;科学家发现胚胎干细胞分化机制[N];科技日报;2008年
7 记者 李大庆;“小小”入选《时代周刊》2009年十大医学突破[N];科技日报;2009年
8 曹淑芬;用胚胎干细胞生成骨骼[N];中国中医药报;2001年
9 闫洁;胚胎干细胞治疗:首次临床试验[N];新华每日电讯;2010年
10 记者 黄堃;利用人类卵细胞,成功培养出胚胎干细胞[N];新华每日电讯;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 谭舟;MK和GM-CSFRα在胚胎干细胞中的表达与功能研究[D];浙江大学;2010年
2 苏中渊;胚胎干细胞来源的间充质干细胞归巢及胚胎干细胞表面分子的研究[D];浙江大学;2010年
3 廖宏庆;人类不同原核数目受精卵中筛选正常优质胚胎的策略研究[D];中南大学;2010年
4 白春玲;牛孤雌多倍体胚胎与克隆多倍体胚胎的研究[D];内蒙古大学;2011年
5 曲文玉;人胚胎干细胞的分离、培养及建系[D];中国医科大学;2006年
6 李相运;小鼠胚胎干细胞多能性研究[D];西北农林科技大学;2001年
7 姚嘉宜;胚胎干细胞重新编程肿瘤细胞的研究[D];第二军医大学;2008年
8 赵惠萍;骨髓内皮细胞条件培养液诱导胚胎干细胞向造血细胞分化[D];中南大学;2003年
9 刘星霞;胚胎干细胞ES-D_3诱导分化为胰岛素分泌细胞及其对糖尿病鼠降糖作用的研究[D];山东大学;2005年
10 宁芳;诱导小鼠胚胎干细胞向牙齿上皮样细胞分化的实验研究[D];第四军医大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙国杰;山羊类胚胎干细胞的分离、克隆[D];河北农业大学;2002年
2 吕一帆;胚胎干细胞在内膜损伤小鼠宫腔内移植的实验研究[D];福建医科大学;2010年
3 周文平;小鼠三种胚胎干细胞表观相关基因的分析[D];河南大学;2011年
4 姜静宜;胚胎干细胞中外源性IbeB靶蛋白的筛选及验证[D];中国医科大学;2010年
5 蔡斌;体外诱导胚胎干细胞为神经细胞模型的建立及相关因子的实验研究[D];第二军医大学;2001年
6 顾文佳;诱导胚胎干细胞向神经细胞分化的研究[D];中国医科大学;2004年
7 刘愿;小鼠球形精子受精胚胎制备及培养方法的改进[D];山东师范大学;2011年
8 秦茂林;小鼠胚胎干细胞的分离、鉴定和神经定向诱导分化[D];第三军医大学;2001年
9 吕志一;小鼠2细胞胚胎基因表达谱研究[D];西北农林科技大学;2010年
10 曲智;大鼠气管粘膜上皮细胞损伤修复过程中胚胎干细胞相关基因OCT3/4的表达及其意义[D];中国医科大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026