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《中国农业科学院》 2012年
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麦长管蚜气味结合蛋白的结合特性及组织定位

钟涛  
【摘要】:昆虫借助灵敏的嗅觉可对环境中各类信息线索进行有效识别,从而准确获悉食物和配偶的方位并躲避捕食者的伤害在嗅觉感知过程中,气味结合蛋白是最先发挥功能的一类蛋白依据豌豆蚜已知基因序列对麦长管蚜气味结合蛋白基因同源克隆,获得7种气味结合蛋白基因(SaveOBP2,JN165749;SaveOBP3,JN165750;SaveOBP4,JN165751;SaveOBP5,JN165752;SaveOBP7,GQ847859;SaveOBP8,GQ888708;SaveOBP9,GQ847860)完整编码序列,都已在GenBank登录对序列进行分析,发现只有SaveOBP5序列中不含气味结合蛋白家族保守结构域从构建的系统发育树中可以看出麦长管蚜气味结合蛋白基因序列分别与麦无网长管蚜和豌豆蚜的直系同源基因有比较一致的进化趋势,可能暗示基因序列与寄主生境的选择压力有某种特殊的联系 对其中6种气味结合蛋白构建了重组表达质粒,并在大肠杆菌中诱导表达借助金属镍亲和层析技术对包含His标签的融合蛋白成功纯化,Western blot结果证实融合蛋白得到完整表达经重组牛肠激酶(rEK)切除His标签,获得接近天然状态的气味结合蛋白利用荧光竞争结合实验研究SaveOBPs与小麦挥发物组份和告警信息素的结合特性,以1-NPN为探针,证实6种气味结合蛋白对C6–C8的小分子气味表现出广谱的结合特性其中,SaveOBP2能够在微摩尔浓度水平上(竞争解离常数在10μM左右)对北京837小麦的挥发物组份较强结合,对其中绿叶气味(如反-2-己烯醛反-2-己烯-1-醇顺-3-己烯-1-醇)以及苯甲醛都表现出较高的亲和性同时,研究发现SaveOBP7能够强烈地结合反-β-法呢烯气味(竞争解离常数为1.3μM),表明SaveOBP7很可能是识别蚜虫告警信息素的一类重要功能蛋白对不同蛋白的结合能力进行比较后发现SaveOBP2SaveOBP3SaveOBP4SaveOBP5和SaveOBP8对C6–C8绿叶气味的结合能力也是存在明显差别的,SaveOBP2在结合小分子醇醛和酯类气味中表现最佳,该蛋白可能在识别寄主挥发物过程中发挥重要作用 利用实时荧光定量技术对其中3个基因(SaveOBP3SaveOBP7和SaveOBP8)进行组织中表达的定位研究,发现其在触角组织中都有表达,推测它们可能参与麦长管蚜的嗅觉识别过程SaveOBP7在足和翅中都未检测到表达,而主要表达于触角组织中SaveOBP3和SaveOBP8均能周身表达,而且在足中表达量较高,可能暗示着它们发挥特殊的嗅觉功能在分析麦长管蚜气味结合蛋白基因在不同发育期的表达,这3个基因在麦长管蚜若蚜的前3个龄期的表达量总体上差别不大,而在若蚜4龄期表达量升高并出现一个表达量高峰,成蚜期又下降并恢复到之前的水平;SaveOBP3和SaveOBP8在有翅成蚜中的表达量均高于无翅成蚜,SaveOBP7在有翅成蚜和无翅成蚜的表达量相当,这种表达差异可能反映出这3种蛋白在麦长管蚜有翅蚜的寄主搜寻过程中存在重要作用
【学位授予单位】:中国农业科学院
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:S435.122

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