金龟子绿僵菌在花生根系环境中的种群适应性及防治效果

【摘要】：绿僵菌在花生田间土壤中的生存适应性直接影响其对花生蛴螬的防治效果。本文建立了土壤中金龟子绿僵菌的实时荧光定量PCR检测方法，研究了绿僵菌在花生根际和根围的宿存能力，确定了施用绿僵菌防治花生蛴螬的最佳时间，探讨了绿僵菌对土壤微生物的影响，研究结果将为提高绿僵菌田间防效提供理论支持，为绿僵菌生态学研究提供基础数据。具体结果如下： 1.用Real-Time PCR评价花生田间金龟子绿僵菌的存活能力。1)比对真菌ITS序列，设计并试验确定了针对金龟子绿僵菌的特异性引物，建立了Real-Time PCR反应体系。标准曲线线性关系良好，方程为y=-3.257x+6.969，扩增效率E=102.8%，检出痕量为20孢/g土。以Real-Time PCR方法和选择性平板分离法，分别检测施菌后不同时期花生根环境绿僵菌DNA量和CFU数量，结果表明两组检测数据的变化趋势相似，证明建立的Real-Time PCR体系适用于土壤金龟子绿僵菌的定量检测，而且对低含量检测更为灵敏。2)施用的金龟子绿僵菌种群在根围与根际都呈现先快速下降后缓慢回升的趋势，但根际的金龟子绿僵菌相对地下降幅度较小而回升较快，90d时根围和根际绿僵菌种群分别为1817CFU/g和5850CFU/g，下降至初始值的2.46%和7.92%，之后出现回升，在120d时分别恢复到初始的16.98%和38.65%，差异显著。 2.确定绿僵菌防治花生蛴螬的最佳施菌时间及防治效果。1)分别进行了在花生播种期（0d）、出苗期（15d）、苗期（30d）、花针期（45d）、初荚期（60d）、荚果期（75d）单次施菌，结果表明，出苗期、苗期、花针期施菌后绿僵菌种群在30-60d出现61.51%-203.23%的增长，其中苗期施菌的绿僵菌种群在荚果期达到最高，为初始量的3.03倍；播种期施菌的在最初15d种群急速下降至21.65%，然后小幅波动；初荚期和荚果期施菌的均呈现持续下降趋势，其中荚果期施菌的下降速度更快，施菌30d后菌量仅为9.00%。对比各施菌防效，表明苗期处理的防治效果最好，花生好果数、好果重分别比对照增加了189.25%、161.96%，虫果减少了50.54%；初荚期以后施菌的防效不明显。2)播种期施菌后，在苗期追加一次施菌，绿僵菌种群动态与苗期单次施菌的相似，在荚果期达到最大，为追加施菌时绿僵菌总量的1.55-2.41倍，收获时虫果减少了47.00%；分别在苗期和初荚期追加两次施菌，即使初荚期施菌量为苗期追加量的4.67倍，但种群变化与只在苗期追加一次施菌的无显著差异，收获时虫果减少率为44.40%，说明结荚后追加施菌并没有增加防效。试验证明，花生苗期是施用绿僵菌防治花生蛴螬的最佳时间。 3.明确绿僵菌对土壤微生物生态的影响。检测了播种期施菌后不同时期根际和根围土中的真菌、细菌和放线菌的CFU数量，比较种群消长，结果表明绿僵菌对三类微生物的影响程度为：放线菌真菌细菌，在根际的影响大于在根围的影响。1)绿僵菌对根际和根围细菌、根围真菌无显著影响；2)绿僵菌使根际真菌种群在初始阶段的下降速度减缓，到达最低量的时间由15d推迟到30d，而回升速度加快，达最大量由60d提前到45d，峰值降低1/3；3)绿僵菌减缓根围放线菌种群下降过程，使达最低量的时间由30d推迟到45d，而回升幅度减小；在根际，施用绿僵菌后明显抑制了放线菌种群，使其消长变化周期与对照完全相反，且45d时回落至低点后不再回升。