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《中国农业科学院》 2016年
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紫花苜蓿总黄酮的提取、纯化及其抗氧化活性研究

荆常亮  
【摘要】:本论文共包括三个部分。首先对回流法和超声波辅助法提取紫花苜蓿总黄酮的工艺参数进行优化,确定提取工艺及参数;然后通过大孔树脂对紫花苜蓿黄酮粗提物进行初步纯化,并用聚酰胺树脂进一步纯化,得到纯度较高的紫花苜蓿黄酮组分;最后通过体外自由基产生系统对紫花苜蓿总黄酮及不同组分进行抗氧化能力的评价。试验一紫花苜蓿总黄酮的提取工艺研究试验一分为两个部分,第一部分旨在优化筛选回流法和超声波辅助法提取紫花苜蓿总黄酮的工艺参数,确定高效提取紫花苜蓿总黄酮的工艺及参数。首先,利用单因素试验研究各个提取因素对紫花苜蓿总黄酮提取率的影响。根据单因素试验结果,通过正交试验设计和响应面试验设计分别对两种工艺进行优化,并对不同提取工艺下紫花苜蓿总黄酮的提取率进行对比。最终确定超声波辅助提取工艺为紫花苜蓿总黄酮提取工艺,确定以下工艺参数:液料比51.16:1(m L/g),提取温度为62.33°C,提取时间57.08 min,乙醇浓度52.14%,此条件下,紫花苜蓿总黄酮提取率为6.40 mg/g。第二部分分别以清除ABTS自由基和清除DPPH自由基为响应值,旨在通过响应面试验设计优化筛选超声波辅助提取紫花苜蓿抗氧化物质的工艺参数,最终确定以下工艺参数:(1)以清除ABTS自由基为评价指标的最佳工艺参数为:液料比47.29:1(m L/g),提取温度62.73°C,提取时间51.62 min,乙醇浓度60%,此条件下,所得提取物对ABTS自由基清除率为87.38%;(2)以清除DPPH自由基为评价指标的最佳工艺参数为:液料比60.30:1(m L/g),提取温度54.56°C,提取时间45.59 min,乙醇浓度46.67%,此条件下,所得提取物对DPPH自由基清除率为80.72%。试验二紫花苜蓿总黄酮的分离与纯化研究本试验旨在通过研究不同树脂对紫花苜蓿总黄酮粗提物的纯化,得到纯度较高的紫花苜蓿黄酮组分。首先对5种不同物理和化学性能的大孔树脂(AB-8、D101、HPD-100、HDP-600和NKA-9)进行筛选,以对紫花苜蓿总黄酮吸附率和解析率为考察指标,确定适宜紫花苜蓿总黄酮纯化的最佳树脂;然后通过考察树脂吸附因素(吸附液p H、吸附温度、上样体积及浓度)对紫花苜蓿总黄酮吸附量的影响,确定最佳吸附条件,最后通过聚酰胺树脂的进一步纯化得到纯度较高的黄酮组分。研究结果表明AB-8大孔树脂对紫花苜蓿总黄酮的吸附量大且易解吸,对紫花苜蓿总黄酮具有较好的吸附和解析性能,适宜用于对紫花苜蓿总黄酮进行纯化。确定的最佳吸附条件为:上样液质量浓度为0.6 mg/m L,上样液p H为4,上样体积为1~4 BV,吸附温度为25 oC。粗提液在最佳吸附条件下经AB-8大孔树脂富集后,以4 BV的蒸馏水和不同浓度的乙醇溶液进行梯度洗脱,得到苜蓿总黄酮的最高纯度组分为33.03%。经过AB-8大孔树脂富集后的紫花苜蓿黄酮类组分再经聚酰胺树脂柱进一步分离纯化,用不同浓度的乙醇溶液进行梯度洗脱达到了良好的分离效果,紫花苜蓿黄酮组分的纯度最高可达到79.62%。试验三紫花苜蓿黄酮类化合物抗氧化作用研究本试验旨在研究紫花苜蓿总黄酮及不同极性洗脱部分的体外抗氧化能力。采用分光光度法,以Vc为对照,研究了对1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基、2;2’-连氮-二(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)自由基、羟基自由基的清除率以及对Fe3+还原能力的测定。结果表明,紫花苜蓿黄酮类化合物具有较好的去除DPPH自由基的能力,清除率最高可达到88.01%;紫花苜蓿黄酮类化合物对ABTS自由基的清除率最高可达到75.25%;在清除羟基自由基的试验中,紫花苜蓿黄酮类化合物对其清除率最高为83.97%,当浓度为0.1 mg/m L时,75%乙醇洗脱组分去除羟基自由基的能力优于Vc。通过对Fe3+的还原能力测定,考察了紫花苜蓿黄酮类化合物的总抗氧化能力,抗氧化活性最高的组分为75%乙醇洗脱组分,其总抗氧化能力值相当于55.19±3.37mg Vc/g。
【学位授予单位】:中国农业科学院
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:S816

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【参考文献】
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