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《中国农业科学院》 2017年
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结核分枝杆菌三基因融合蛋白免疫效力评价

王磊  
【摘要】:目前,结核病(Tuberculosis,TB)的防控形势依然很严峻,耐药性结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)菌株的出现更加重了对人类的危害,而现今尚没有非常有效的方法解除结核病对人类的威胁。疫苗接种是控制传染病最有效的干预措施,因此加快结核病疫苗的研发是非常必要的。本研究探索了几个亚单位蛋白(Rv0199-Rv0394c-OmpA(RRO),Rv3802c-Ag85A-TB10.4(RAT),Rv2660c-Mtb32A-MPT51(RMM))的疫苗功效,比较了菌蜕(Ghost)佐剂和弗氏不完全佐剂(Incomplete Freund Adjuvant,IFA)对亚单位疫苗的免疫增强效果的研究。本实验将9个目的基因以3个一组分别串联入表达载体中,成功表达并获得了相应的3个融合蛋白,将3个融合蛋白分别与弗氏不完全佐剂(Incomplete Freund Adjuvant,IFA)和沙门氏菌菌蜕(Ghost)组合,对小鼠进行免疫及评价相应的检测指标。实验结果显示,蛋白RRO组在一免时就能产生较高水平的抗体效价;RAT与RMM组的CD4+T淋巴细胞在二免后才与RRO组持平;二免后RRO组的IL-4的分泌量亦高于其他两组;蛋白RRO的其他指标与另外两个融合蛋白无明显差异,表明RRO作为抗原引起的机体的免疫应答要强于其他两个融合蛋白。通过对商品化IFA与沙门氏菌Ghost佐剂功效的对比后发现,在诱导抗体效价方面,Ghost组的抗体水平仅在一免时期低于IFA组,二免后各组之间已经没有明显的差异;在淋巴细胞分化方面,不同的蛋白一免时CD4+T淋巴细胞占比,Ghost组与IFA组的高低情况不一,在二免时,两种佐剂之间各淋巴细胞的占比已没有明显差异;在安全性方面,Ghost作为佐剂的安全性与IFA持平,甚至在某些方面要优于IFA。因此,沙门氏菌Ghost作为佐剂所起到的作用可以与商品化的IFA相媲美。综上所述,本研究成功表达和纯化了结核分枝杆菌三个融合蛋白RRO、RAT、RMM,这些融合蛋白可刺激小鼠机体产生良好的免疫应答,其中RRO要好于其他两个融合蛋白;对沙门氏菌菌蜕的评估显示其具有良好的亚单位疫苗的佐剂功能。
【学位授予单位】:中国农业科学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S852.4

【参考文献】
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