Ⅰ.两种伪狂犬病病毒诊断检测方法的建立 Ⅱ.影响猪瘟病毒复制的lncRNAs的筛选

【摘要】：伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染引起的家畜和野生动物的烈性传染病。从2011年底开始,我国多个省份免疫过Bartha-K61弱毒疫苗的猪场相继爆发伪狂犬病,研究表明,此次疫情由PRV变异株引起。本研究建立了一种三重荧光定量PCR检测方法,基于三种标记不同荧光信号的TaqMan探针,该方法可以鉴别检测PRV经典株、变异株和Bartha-K61疫苗株。该方法对TJ株、SC株和Bartha-K61的检测限分别为50、50和5拷贝。应用三重荧光定量PCR方法和病毒分离方法对234个样品进行检测,结果显示,两种方法的符合率分别为100%(经典株)、99.2%(变异株)和100%(Bartha-K61疫苗株)。以上结果表明,该方法具有良好的灵敏性和特异性,可以应用于PRV毒株的区别检测。本研究还建立了一种交叉引物扩增—试纸条联用法(CPA-strip)用于检测PRV野毒。应用建立的检测方法对PRV变异株进行检测,最低检测限为200个拷贝。特异性检测结果显示,该方法与一些常见的猪病病毒无交叉反应性。对293个临床样品进行检测,结果显示,CPA-strip与三重荧光定量PCR的符合率为100%(293/293),与病毒分离的符合率为97.3%(285/293)。以上结果表明,该方法具有良好的灵敏性和特异性,操作简便,可用于PRV的现地检测。长链非编码RNA(lncRNAs)是细胞内长度超过200 nt的一类非编码RNA分子,可通过调节邻近基因的表达参与宿主的抗病毒应答。在本研究中,我们对感染猪瘟病毒(CSFV)猪的外周血单个核细胞内总RNA进行测序,发现4万余个新的lncRNAs分子。同时,我们发现有6个lncRNAs与邻近的抗病毒基因表达正相关,符合lncRNAs调控基因表达的特征。进一步的研究结果显示,lncRNA__2522可以抑制OAS2基因的表达。