收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

伪狂犬病病毒潜伏感染相关转录物LLT表达特征的研究

陈静  
【摘要】:伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是一种由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起多种家畜和野生动物的急性、热性传染病,但只有猪是PRV的唯一贮存宿主。伪狂犬病能给养猪业造成极大的经济损失,特别是2011年末以来PRV变异株在我国的爆发流行,严重影响了养猪业的健康发展。与其他疱疹病毒类似,PRV急性感染后能够在宿主体内形成潜伏感染,潜伏感染时期,病毒基因组不复制,也不表达病毒蛋白,仅大量转录病毒潜伏相关转录物(Latency Associated Transcripts,LATs)。然而,长期以来,关于LAT转录特征及调控机制的研究较为缺乏,其转录与调控机制及对病毒感染复制的影响也不清楚。LATs是由大的潜伏相关转录本(Large Latency Transcripts,LLT)分子剪接加工形成的,为了研究PRV LLT两个启动子LAP1和LAP2在其转录调控方面的作用机制,本研究首先构建一系列供体质粒,包括缺失LAP1、缺失LAP1并添加绝缘子cHS4或添加强启动子CMV、同时缺失LAP1/P2等。然后,利用BAC/galK系统将galK基因替换LLT的启动子区域,经正、负筛选后将构建不同质粒的目的基因替换galK基因,经PCR鉴定筛选到不同的阳性克隆,分别提取各个阳性克隆的BAC DNA,并将其与pcDNA3.1-cre质粒共转染至Vero细胞,成功拯救出缺失相关启动子的突变病毒(vJS-△LAP1、vJS-cHS4-△LAP1a、vJS-cHS4-△LAP1b、vJS-CMVp-△LAP1、vJS-△LAP1/P2和vJS-cHS4-△LAP1/P2)。进一步对亲本病毒JS-2012和突变病毒的体外生物学特性进行比较研究,结果显示:突变病毒在空斑大小和形态上都与亲本病毒没有显著差异。病毒一步生长曲线表明,各突变病毒与亲本病毒的复制动力学特征基本一致。进一步,我们对突变病毒的潜伏相关转录本表达特征进行了分析,发现启动子缺失病毒在感染的Vero细胞中存在LLT内部ORF1和ORF2基因的转录,在小鼠脑组织和三叉神经组织也能检测到LLT的表达,表明LLT启动子的缺失并没有造成LLT转录的完全关闭。但LLT启动子缺失使LLT内含子中编码的多种miRNA(miR-2-3’、miR-5和miR-9-3’)分子的转录水平显著降低,表明LLT启动子对该区域的miRNA分子转录存在调控作用,但是LLT启动子调控病毒miRNA分子表达所产生的生物学意义还需要进一步的研究确定。综上所述,本研究利用BAC/galK反向遗传操作系统,以PRV JS-2012作为骨架,获得了一系列LLT启动子LAP1/P2突变的PRV病毒株,通过对各突变病毒株的体内外生物学特性分析,发现LLT启动子突变不能显著影响病毒的体内外生物学特性,也不能关闭LLT内部ORF1和ORF2基因的转录。但是LLT启动子的缺失,会显著下调病毒LLT内含子内部多个miRNA分子的转录。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前18条
1 毛海;;伪狂犬病病毒变异[J];现代化农业;2017年02期
2 王丽君;姜虹;杨春梅;;杂多化合物抗伪狂犬病病毒的活性研究[J];吉林医学院学报;1999年03期
3 代卓见;伪狂犬病病毒分子生物学研究新进展[J];国外兽医学.畜禽疾病;1996年01期
4 黄银君,周育彪;伪狂犬病病毒的分子生物学研究进展[J];中国兽医杂志;1995年01期
5 郏自明,谷长勤,胡薛英,程国富,吴美洲,周诗其;SABC法对伪狂犬病病毒鄂A株在仔猪体内的定位[J];中国兽医科技;2005年08期
6 倪杉;陕A株伪狂犬病病毒的分离与鉴定[J];兽医科技资料;1979年02期
7 钱平,李祥敏,陈焕春,金梅林,何启盖;表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP3基因的重组伪狂犬病病毒的构建[J];中国生物化学与分子生物学报;2003年03期
8 王永贤,陆明昌,罗子起;伪狂犬病病毒YN株的分离鉴定[J];兽医大学学报;1984年04期
9 佘柏荣,魏振明,程由铨;广东吴川株伪狂犬病病毒的鉴定[J];中国兽医杂志;1986年07期
10 杨元杰,孟广校,战克俭,陈忠国,宫云浩,蒋正军,吴时友;应用PCR技术检测伪狂犬病病毒[J];动物检疫;1992年03期
11 李柠;伪狂犬病病毒[J];国外兽医学.畜禽疾病;1995年03期
12 ;伪狂犬病病毒YN株分离成功[J];兽医大学学报;1984年03期
13 龙木措;;一例藏羊感染伪狂犬病病毒的诊治[J];当代畜禽养殖业;2019年04期
14 王家富,丁建华,张光道,罗满林,张楚瑜;PCR检测伪狂犬病病毒的研究[J];武汉大学学报(自然科学版);1996年06期
15 殷华平;郭万柱;徐志文;杨丽;;影响伪狂犬病病毒同义密码子用法特点的因素分析[J];浙江大学学报(农业与生命科学版);2007年03期
16 邹莹;应用PCR检测伪狂犬病病毒DNA[J];兽医科技信息;1995年12期
17 张克山;刘永杰;孔汉金;尚佑军;逯忠新;田宏;尹双辉;刘湘涛;;绵羊伪狂犬病病毒的鉴定及序列分析[J];中国兽医科学;2013年03期
18 刘贺生;崔保安;何宝祥;;伪狂犬病病毒血凝及血凝抑制试验[J];中国兽医杂志;2005年12期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 赵凤云;涂长春;张玉静;欧阳红生;张永亮;刘思国;刘伯华;;伪狂犬病病毒基因缺失突变体的克隆与测序[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
2 李富强;张莉;刘尚高;王双山;靳玉芬;欧阳素贞;;伪狂犬病病毒北京株的纯化及电镜观察[A];猪的重要传染病防治研究新成果——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会论文集[C];2002年
3 吕素芳;郭广君;魏凤;唐娜;沈志强;;重组伪狂犬病病毒疫苗的研究进展[A];首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛论文集(2008)[C];2008年
4 崔保安;付元帅;张素梅;魏战勇;杨明凡;;金银花对伪狂犬病病毒体外抑制作用的实验研究[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(上)[C];2003年
5 胡勤芹;马相如;陈焕春;;伪狂犬病病毒的结构蛋白与功能[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(上)[C];2003年
6 周金柱;王小波;李爽;高清请;李峥;谢迪;许默儒;高崧;;三株伪狂犬病病毒对小鼠和猪的致病性比较[A];中国猪业科技大会暨中国畜牧兽医学会2015年学术年会论文集[C];2015年
7 韦冠东;马萍;汤德元;张元鑫;刘霞;黄涛;曾智勇;李谦;李达;;伪狂犬病病毒主要基因变异及与gE/gB基因有关的净化方法研究[A];第七届中国畜牧科技论坛论文集[C];2016年
8 赵凤云;张玉静;涂长春;欧阳红生;张永亮;刘思国;刘伯华;;PCR方法克隆伪狂犬病病毒立即早期蛋白IE180激活型基因突变体[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展(上册)[C];2001年
9 仇华吉;童光志;李昌文;周彦君;钱平;孔令达;;表达猪生殖-呼吸道综合征病毒GP5基因的重组伪狂犬病病毒的构建[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
10 刘文强;范伟兴;赵宏坤;;伪狂犬病病毒La株gE基因的序列分析及真核表达载体的构建[A];猪的重要传染病防治研究新成果——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会论文集[C];2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 周末;Ⅰ.伪狂犬病病毒基因组Fosmid文库的构建及其应用 Ⅱ.抗伪狂犬病病毒干扰素刺激基因的筛选与鉴定[D];中国农业科学院;2018年
2 孟星宇;Ⅰ.两种伪狂犬病病毒诊断检测方法的建立 Ⅱ.影响猪瘟病毒复制的lncRNAs的筛选[D];中国农业科学院;2018年
3 叶超;伪狂犬病病毒遗传变异及UL41和UL24基因功能分析[D];中国农业科学院;2018年
4 阳爱国;伪狂犬病病毒主要毒力基因功能的研究[D];四川农业大学;2005年
5 张焕容;伪狂犬病病毒、猪细小病毒和流行性乙型脑炎病毒检测基因芯片的构建及检测技术研究[D];四川农业大学;2005年
6 袁子国;表达狂犬病病毒糖蛋白的重组伪狂犬病病毒的构建及免疫试验研究[D];吉林大学;2008年
7 苏鑫铭;伪狂犬病病毒细菌人工染色体的构建及应用[D];南京农业大学;2006年
8 覃雅丽;猪伪狂犬病鉴别诊断方法的研究及单克隆抗体的制备[D];华中农业大学;2002年
9 王一平;伪狂犬病病毒DNA聚合酶入核转运的分子机制[D];中国农业科学院;2016年
10 徐静;乙型脑炎病毒—伪狂犬病病毒二联基因工程疫苗研究[D];四川农业大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈静;伪狂犬病病毒潜伏感染相关转录物LLT表达特征的研究[D];中国农业科学院;2019年
2 程雪飞;伪狂犬病病毒UL23基因转录调控机制研究[D];中国农业科学院;2019年
3 周鑫韬;伪狂犬病病毒基因缺失株JL14-△gI/gE/TK构建及特性研究[D];吉林农业大学;2018年
4 向广韬;应用CRISPR/Cas9技术抑制伪狂犬病病毒的再激活[D];中国农业科学院;2018年
5 隋秀文;十种药物抗伪狂犬病病毒感染的实验研究[D];东北农业大学;2010年
6 王敏秀;Cre/loxP系统在重组伪狂犬病病毒中的应用[D];南京农业大学;2005年
7 武吉强;伪狂犬病病毒高温传代毒株生物学特性改变的分子基础[D];中国农业科学院;2017年
8 许梦微;伪狂犬病病毒gE基因缺失株(LA-A株)的构建及免疫效力研究[D];南京农业大学;2016年
9 姜丽;表达弓形虫SAG1伪狂犬病病毒的构建及免疫研究[D];吉林农业大学;2008年
10 龚才伟;一株伪狂犬病病毒的分离鉴定及其gE基因的遗传进化分析[D];西北农林科技大学;2016年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978