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《中国农业科学院》 2000年
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广亲和四倍体水稻原种花药培养筛选初级三体及其分子鉴定的研究

陈红  
【摘要】: 在水稻的遗传育种研究中,初级三体起着非常重要的作用。长期以 来,许多研究者从事着创造水稻成套初级三体的研究工作,但它们大多 是采用费时费力的同源三倍体途径创造三体。本研究采用的是一条新的 筛选初级三体的途径——四倍体水稻花药培养途径创造初级三体,即利 用四倍体水稻减数分裂时产生不规则分离的配子体,花药培养途径可以 充分表达其配子体类型的原理创造初级三体。本研究以广亲和四倍体水 稻原种和其二倍体材料为对照进行花药培养,诱导愈伤和植株再生,在 花粉植株及其后代中筛选三体。同时实验中还分别对碳源种类、琼脂浓 度、激素配比等影响水稻愈伤组织诱导和分化的因素作了一系列实验, 以求获得更多的试管苗,为筛选三体奠定坚实的基础,试图得到遗传背 景一致的广亲和水稻成套三体。根据不同三体株表型农艺性状的不同初 步划归三体,并对其花粉母细胞染色体进行细胞学观察及粗线期核型分 析,从而确定三体的归属。鉴于粗线期核型分析的难度较大,在实验中 尝试利用分子标记的手段进行三体的鉴定,即利用三体比二倍体对照多 一条额外染色体,在DNA总量一定的情况下,三体株某3条同源染色体 的DNA含量大于正常株对应的两条染色体的DNA含量,用已在染色体 上定位的探针进行标记,最终量的差异表现为杂交带的差异的原理鉴定 三体。从而试图找到一个新的鉴定三体的简单有效的手段。本论文实验 的研究结果如下: 1、基因型间存在的遗传差异是影响水稻花培效率的重要因素之一。粳稻 材料零轮、02428的诱导率、绿苗率显著好于籼稻材料轮回422、培 矮64。四倍体材料的愈伤诱导效果好于二倍体对照。基因型对培养基 也有选择性,如零轮在22号诱导培养基上的诱导率可达84%;02428 在24号诱导培养基上的诱导率可达63%;轮回422在有激动素的培 养基上的诱导率为28%。 2、不同的碳源和琼脂浓度对诱导效率都会产生较大的影响。低糖浓度 K0叭)时蔗糖的诱导效果好于麦芽糖的诱导效果,低蔗糖的0旮L) 与高浓度的琼脂*%)配合的效果好;高浓度旧0叭)时麦芽糖的诱导 效果好于蔗糖的诱导效果,高浓度麦芽糖30叭)与低浓度的琼脂O.5%) 配合的效果好。 3、培养基中加上激动素的诱导效果显著提高。KT的诱导效果略好于 ZIP。 4、N6、NB培养基比MS、MB培养基更适合诱导愈伤。 5、低温预处理的时间的长短也影响着愈伤组织的诱导率。 6、对于诱导愈伤组织来说,16、22、24三种配方最好,5、17、21、23、 NBK次之;5、16、22、24、NBK这几种配方诱导的愈伤质量较好, 较易出苗。 7、对于9983007-2-8,998040-3-4,998040-2-5三个三体的粗线期核型分 析的结果9983007-2-8为三体8;998040-3-4,998040-2-5为三体5。 分子鉴定的结果与粗线期核型分析的结果完全吻合,说明这种方法是 可行的。
【学位授予单位】:中国农业科学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2000
【分类号】:S511.035.3

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【参考文献】
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