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《中国农业科学院》 2001年
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利用原生质体非对称融合转移胡萝卜瓣化型细胞质不育性的研究

司家钢  
【摘要】: 胡萝卜瓣化型细胞质雄性不育性常规回交转育一般至少需要5-6年的 时间,原生质体非对称融合方式转移这种雄性不育性可使时间大大缩短, 从而加快育种的进程。本试验在Tanno Suenaga等的研究基础上,对胡萝 卜原生质体非对称融合的基础体系进行了较广泛的研究;进行了61次胡 萝卜种内原生质体非对称融合,从19次融合中获得愈伤和胚状体,从6 个组合获得了植株再生;对再生植株进行了形态学、细胞学和分子生物学 鉴定。主要研究结果如下: 1.基因型是影响胡萝卜固体培养和细胞悬浮培养中愈伤组织状态的重 要因子,并由此影响到分离原生质体的产量和质量,进而影响原生质体的 愈伤再生和植株再生,因此,在进行胡萝卜原生质体非对称融合前首先对 基因型进行筛选是必要的。 2.通过麦芽提取物和谷氨酰胺两种物质的添加,可以起到抑制非胚性 愈伤生长的作用,使培养物主要以胚性愈伤为主;通过液体培养基2,4-D 浓度的改变,可调节胚性愈伤处于合适的发育时期,便于原生质体的分离。 3.通过胡萝卜原生质体培养愈伤和胚状体发生过程的观察,认为胡萝 卜原生质体培养胚状体的直接来源是愈伤组织,而不是原生质体细胞本 身。 4.UV和X-射线的作用机制相似,原生质体对UV射线更为敏感。UV 辐射可以很好地起到抑制原生质体再生和愈伤组织生长的作用,可以用作 胡萝卜的供体处理;UV和X-射线辐射处理供体原生质体都存在处理效 果不稳定的情况,因此在融合杂种筛选中应着重注意淘汰供体基因型; IOA抑制胡萝卜原生质体细胞分裂的适宜剂量是15mM浓度处理10min, 其处理效果稳定。 5.Ca~(2+)离子浓度过高,使原生质体在交流电场下不能串珠状连接,从而 影响电融合,胡萝卜原生质体电融合Ca~(2+)离子的适宜浓度为0.5mM;优 化的胡萝卜原生质体电融合参数是:交流电场(AC)70V/cm,作用时间 60s;直流电场(DC)1500V/。m,5次脉冲,间隔卜,直流脉冲印加时间 50 K 6.STS。标记与胡萝卜瓣化型胞质雄性不育性密切相关,可以用作胡萝 卜体细胞杂种瓣化型胞质雄性不育性的分子鉴定,并可用于胡萝卜一代杂 种的纯度鉴定。 7.愈伤组织的植株再生是制约胡萝一卜对称融合转移胡萝卜雄性不育 性最终能否成功的一个重要环节,内源激素的调控与植株再生相关。此外, 原生质体预处理的后效应也是值得考虑的因素。影响胡萝卜融合体愈伤植 株再生的因子是今后研究的重要内容。 8.温度是影响胡萝卜再生植株移栽成活的主要因素。胡萝卜组培苗较 耐低温,10度左右的平均温度下仍能移栽成活,但是对于高温忍耐性较 差,平均温度为30度以上的高温情况下,难于移栽成活。 9.通过形态学、细胞学和分子生物学鉴定,确认组合7-0-8-4+66-3的再 生植株为胞质杂种,成功通过非对称融合方式将供体7.0.8.4的瓣化型胞 质雄性不育性转移到受体66-3中,认为原生质体非对称融合可以成为转 育胡萝卜瓣化型胞质雄性不育性的补充手段。 论文对影响胡萝卜原生质体非对称融合的若干因子、组培茵的先期 抽墓、利用非对称融合转移胡萝卜瓣化型雄性不育性的可行性、本研究存 在的问题及改进方案以及非对称原生质体融合在胡萝卜资源创新中的应 用价值等进行了讨论。
【学位授予单位】:中国农业科学院
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:S631.203.5

【引证文献】
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中国硕士学位论文全文数据库 前6条
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