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《中国农业科学院》 2001年
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蓖麻蚕线粒体DNA片段的克隆和序列分析

魏兆军  
【摘要】: 利用蓖麻蚕花篮的蚕蛹为材料,提取蓖麻蚕线粒体DNA(mtDNA),与质 粒pSK(+)(Amp~r)载体分别经EcoRI和XbaI双酶解,再经过连接、转化等, 筛选出两个重组体,经酶切鉴定,证明获得了蓖麻蚕mtDNA EcoRI-XbaI 1.0kb和3.0kb两个克隆片段,并进一步进行序列分析。 对两个克隆片段进行了部分序列测定、比较和分析,推定蓖麻蚕mtDNA EcoRI-XbaI 1.0kb中包含细胞色素氧化酶亚基Ⅲ(COX3)基因,甘氨酸tRNA 基因(tRNA-Gly)和NADH氧化还原酶亚基Ⅲ(ND3)基因5’端的部分序列 (GenBank Accession NO. AF288145)。蓖麻蚕线粒体COX3基因编码框包含 789个核苷酸,编码262个氨基酸的蛋白质;tRNA-Gly基因长度为66bp,与 家蚕线粒体tRNA-Gly基因同源性为98.48%,缺少可变环;ND3基因的部分 序列含151个碱基,与家蚕线粒体ND3基因的对应的核苷酸同源性为 73.51%,蓖麻蚕的起始密码子为ATT,而家蚕为ATA。蓖麻蚕mtDNA EcoRI -XbaI 3.0kb中包含NADH氧化还原酶亚基Ⅵ基因(ND6)、细胞色素b基因 (Cytb)和16srRNA基因的部分序列,三者与家蚕的相应片段的同源性分别为 64.9%、75.2%和80.4%,由于皆为基因的部分序列,实际二者的同源性也会 有所出入。 利用我们克隆的蓖麻蚕线粒体COX3基因序列,并通过检索GenBank的 其它16种mtDNA COX3序列,进行了线粒体COX3序列同源性比较,并进行 了分子系统演化方面的探讨。同源性比较发现COX3基因的3′端比5′端更保 守,其编码的蛋白在C端有两个保守序列存在;蜜蜂与其它所有的物种同源 性最低;蓖麻蚕的COX3与家蚕COX3同源性最高,核苷酸和氨基酸序列同源 性分别是80.23%和85.6%,蓖麻蚕与5种脊椎动物的同源性均较低。mtDNA COX3编码氨基酸组成中丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、谷氨酸、苯丙 氨酸、丝氨酸和苏氨酸的含量较高,精氨酸、半胱氨酸等的含量较低;疏水 性氨基酸的含量为43.30%~48.47兄蜜蜂的COX3氨基酸组成与其它物种差 别较大;蓖麻蚕与家蚕的组成变化不大。基于 mtDNA COX3核昔酸和氨基酸 序列的分子系统树基本一致,仅仅物种间的距离稍微有所变化。基于mtDNA COX3序列数据构建的分子系统进化树基本上可反映一组物种的亲缘关系,但 东亚飞蝗和蜜蜂在分子系统树中与形态系统中的结果明显不同,可能与生态 环境及繁殖方式有关。因此,在采用线粒体基因序列进行分于进化分析时, 应该综合考虑其繁殖模式及生态特点。
【学位授予单位】:中国农业科学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:S885.21

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【引证文献】
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【参考文献】
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【同被引文献】
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【二级引证文献】
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【二级参考文献】
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