收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

被毛孢OWVT-1丝氨酸蛋白酶的分离纯化、性质研究及基因克隆

汪斌  
【摘要】: 洛斯里被毛孢(Hirsutella rhossiliensis)是通过黏性孢子黏着于线虫并侵染和消解线虫的线虫内寄生真菌。由于在自然界中对线虫寄生率高、寄生性强、与线虫抑制性土壤有关、自然条件下为专性寄生菌,因而极具生防应用潜力。OWVT-1是本实验室筛选出的一株洛斯里被毛孢高效生防菌株。通过对金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)中类枯草杆菌蛋白酶(Pr1)研究已经证明丝氨酸蛋白酶是真菌侵染无脊椎动物过程中的一个关键酶,是致病性决定因子。食线虫真菌丝氨酸蛋白酶的研究,为真菌侵染线虫的分子机理提供理理论基础,同时对丝氨酸蛋白酶基因的分离,为改良及构建工程菌株提供坚实的基础。 本研究利用线虫诱导下OWVT-1菌株液体发酵,通过粗分级分离、离子交换层析和凝胶过滤层析分离提纯了一个分子量为31kDa的丝氨酸蛋白酶,生物学测定表明其对大豆胞囊线虫二龄幼虫具有致死作用,同时测定了该酶理化特性,酶活力在75℃附近酶活力最高,随着pH的增加酶的稳定性升高,与胆碱酯酶具有相似的pH曲线,对特异性底物AAPE(Suc-Ala-Ala-Pro-Glu-PNA)具有作用,SSI和CI-2抑制该酶的活性。该酶分子N-端的氨基酸序列为AVIDTGVEASHPEF,通过N-端氨基酸序列设计简并引物,提取被毛孢OWVT-1的总RNA,RT-PCR克隆了该酶的成熟肽编码基因(1000bp),序列分析表明,丝氨酸含量高达12%以上。与其他丝氨酸蛋白酶基因序列比较表明,与其他线虫卵寄生性真菌如Paecilomyces lilacinus、Verticillium chlamydosporium及M. anisopliae var. anisopliae同源性较高,而与捕食线虫真菌Arthrobotrys oligospora同源性较低(45%)。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 韩宝芹;冯伊琳;毕庆庆;刘万顺;隋正红;杨官品;;单环刺螠纤溶酶Ⅱ的基因克隆[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2011年Z2期
2 侯爵;刘颖;邵一鸣;;黄热病毒的基因组及其蛋白研究进展[J];病毒学报;2011年04期
3 丁存宝;刘海燕;李桂秋;吴尚卓;贾长虹;;HCV NS3/4A蛋白酶抑制剂细胞筛选模型[J];生命的化学;2011年04期
4 沈定树;余方友;;肠出血性大肠埃希菌O157:H7及其质粒O157的研究进展[J];中国卫生检验杂志;2011年06期
5 刘惠莉;方莹;;猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白NSP4细胞核定位研究[J];南京农业大学学报;2011年04期
6 张晓嫒;叶长芸;徐建国;;肠出血性大肠埃希菌O157:H7质粒pO157上毒力因子的研究进展[J];疾病监测;2011年06期
7 钱云霞;顾晓英;;甲壳动物血液凝固的分子机制[J];生物技术通报;2011年06期
8 段东霞;;污损生物附着机理及酶在生物防污中的应用[J];海洋科学;2011年07期
9 邓志会;孙贺;林岩;王国忠;金莉;洪敏;;一种新型具有纤溶活性的沙蚕金属蛋白酶的分离纯化及鉴定[J];中国生物化学与分子生物学报;2011年08期
10 廖素环;张民秀;施李鸣;黄伟坚;韦英益;;类枯草杆菌蛋白酶的生物学功能及其在农牧业疾病控制中的应用[J];安徽农业科学;2011年23期
11 董超华;;斑马鱼甘露糖结合蛋白基因的分离及生物信息学分析[J];科技信息;2011年18期
12 肖英平;刘玮;胡向萍;孙翀;黄婷;;鱼类胰蛋白酶研究进展[J];江西教育学院学报;2011年03期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 赖屹玲;刘杏忠;;食线虫真菌对线虫功能反应的应用及分子机制[A];2010年中国菌物学会学术年会论文摘要集[C];2010年
2 莫明和;张克勤;曹蕾;;食线虫真菌群落多样性初探[A];全国生物防治学术讨论会论文摘要集[C];1995年
3 刘杏忠;裘维蕃;;食线虫真菌的研究进展[A];中国虫生真菌研究与应用[C];1991年
4 刘碧朗;梁九波;况前;何宁佳;;家蚕酚氧化酶原激活系统主要成分的生物信息分析[A];中国蚕学会第六届家蚕和柞蚕遗传育种学术研讨会论文集[C];2009年
5 李天飞;张克勤;刘杏忠;;食线虫真菌研究简史[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第四卷)[C];1996年
6 邹成钢;屠惠慧;张克勤;;PacC基因调控粉红螺旋聚孢霉胞外丝氨酸蛋白酶基因PrC的表达[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
7 汪斌;吴文平;刘杏忠;李世东;;被毛孢OWVT-1丝氨酸蛋白酶HR的分离纯化、性质研究及cDNA克隆[A];中国菌物学会第三届会员代表大会暨全国第六届菌物学学术讨论会论文集[C];2003年
8 金扬;吕秋敏;魏继福;李东升;王婉瑜;熊郁良;;菜花烙铁头蛇毒丝氨酸蛋白酶的基因克隆、序列分析及三级结构模拟[A];中国毒理学会生物毒素毒理专业委员会第4次、中国生物化学与分子生物学会毒素专业组第5次学术研讨会论文摘要[C];2001年
9 徐文岳;黄复生;张敬如;段建华;;大劣按蚊丝氨酸蛋白酶部分cDNA克隆与序列测定[A];中国动物学会第八次全国寄生虫学学术讨论会论文摘要汇编[C];2001年
10 莫明和;;利用食线虫真菌防治植物寄生线虫的研究进展[A];中国植物病理学会2009年学术年会论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 史影;新型丝氨酸蛋白酶SNC19生物学特性及肿瘤转移功能的研究[D];浙江大学;2004年
2 刘淑芬;食线虫真菌Hirsutella minnesotensis和Hirsutella rhossiliensis的生态学研究[D];河北农业大学;2004年
3 胡晓晔;一种新的丝氨酸蛋白酶——SNC19(ST14)基因编码蛋白的生物特性的研究[D];浙江大学;2002年
4 王昭;N-V蛋白酶的溶栓机理及酶学特点研究[D];吉林大学;2006年
5 刘丽华;稻瘟病菌几丁质酶和丝氨酸蛋白酶之水稻受体研究[D];福建农林大学;2009年
6 赵明莲;食线虫真菌侵染性胞外蛋白酶的基因克隆与表达[D];云南大学;2003年
7 张卫卫;弧菌琼胶酶和丝氨酸蛋白酶的筛选、分析以及免疫应用[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2009年
8 赵喜亭;失水胁迫对月季切花花瓣内肽酶种类及其活性的影响[D];中国农业大学;2005年
9 朱玲;扇贝丝氨酸蛋白酶及其抑制剂基因的克隆与表达[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2006年
10 许建强;基因重组大连蛇岛蝮蛇类凝血酶的制备与性质表征[D];大连理工大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 汪斌;被毛孢OWVT-1丝氨酸蛋白酶的分离纯化、性质研究及基因克隆[D];中国农业科学院;2002年
2 侯晓彦;中国南海细菌Pseudoalteromonas sp.CF4-3所产丝氨酸蛋白酶研究[D];山东大学;2010年
3 于建立;旋毛虫成虫丝氨酸蛋白酶对宿主免疫细胞影响的初步研究[D];吉林大学;2012年
4 李倩倩;三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)丝氨酸蛋白酶及其同源物的基因克隆和表达分析[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2012年
5 裴剑竹;中介蝮(Gloydius intermedius)蛇毒一种丝氨酸蛋白酶的分离及生物学活性研究[D];陕西师范大学;2012年
6 朱洋铿;菜粉蝶丝氨酸蛋白酶基因克隆与表达模式分析[D];浙江大学;2011年
7 陈艳;鱼肉肌原纤维凝胶的modori产生机理研究[D];浙江工业大学;2004年
8 陈蕊;两栖单顶孢菌(Monacrosporium Janus)菌寄生性的酶学机理研究[D];中国农业科学院;2005年
9 黄斌锋;福建省蔬菜根结线虫病病原鉴定与食线虫真菌应用的初步研究[D];海南大学;2011年
10 刘珅坤;利用秀丽隐杆线虫对植物寄生线虫生防真菌的研究[D];山东农业大学;2008年
中国重要报纸全文数据库 前9条
1 记者 熊燕;中科院昆明动物研究所揭示蚊子吸血特性[N];云南日报;2009年
2 本报特约撰稿人 陆志城 樊凤辉;NS3蛋白酶抑制剂挑战HCV[N];医药经济报;2003年
3 ;冠心病又有好药治了[N];中国中医药报;2000年
4 冯瑶;急性脑出血可用中医药治[N];健康报;2005年
5 通讯员 冯瑶;中医中药可干预治疗急性脑出血[N];家庭医生报;2004年
6 陆志城;2001年批准上市的新分子实体药物[N];医药经济报;2002年
7 青锋;应用抑肽酶须防副作用[N];医药经济报;2001年
8 常丽君;简单注射即可降低心脏病和中风损伤[N];科技日报;2011年
9 驻京记者 王丹;一类新药蛇毒血凝酶“苏灵”上市[N];医药经济报;2009年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978