收藏本站
《中国农业科学院》 2004年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

J亚群禽白血病病毒分离株变异分析及重组抗原ELISA检测方法的建立

付朝阳  
【摘要】:J亚群禽白血病(Subgroup J Avian Leukosis)是由反转录病毒科J亚群禽白血病病毒(AvianLeukosis Virus of Subgroup J,ALV-J)引起的一种传染性致骨髓细胞瘤疾病或成髓性白血病。该病自20世纪80年代末发现以来,以垂直和水平传播两种形式在世界各国肉种鸡及商品肉用型鸡中广泛流行,引起肉种鸡死亡和消瘦,严重生长发育不良,发生机体免疫抑制,给世界各国养鸡业带来了极大的危害。近年来,世界各国均采取措施,通过淘汰患病鸡群,减少垂直传播从而达到净化种群的目的,而我国这方面的工作相对滞后。因此,在国内进行该病的流行病学研究、分离鉴定病毒株并进行其分子生物学特性研究、建立国内适用的血清学诊断方法对国内防制该病流行、开展种群净化具有重大意义。 本研究首先采用ALV-J特异性引物,用RT-PCR检测患鸡病料、PCR检测细胞培养获取的前病毒基因组、基因序列测定、细胞培养物接种动物等方法从黑龙江省哈尔滨市以及吉林省某种鸡场送检的患病鸡体内,分离鉴定了两株ALV-J病毒,分别命名为Hrb-1和JL-2株。采用依据参照毒株HPRS-103cDNA序列设计并合成的一对引物,自Hrb-1和JL-2前病毒DNA中PCR扩增得到了Hrb-1和JL-2株囊膜基因,分别构建了重组质粒pMD18-T-Hrb-1/env和pMD18-T-JL2/env。在序列测定的基础上,对gp85和gp37基因片段的核苷酸序列及其推导氨基酸序列与国际上不同的参照毒株以及国内部分分离株进行了比较分析,结果表明Hrb-1与JL-2病毒株间gp85、gp37基因的同源率分别为91.5%和92.7%,推导的gp85氨基酸序列的同源率为85.3%,遗传变异分析结果表明JL-2和Hrb-1分别与美国病毒株ADOL-HC-1和UD3有着较大的亲缘关系。 本研究根据原核表达载体pGEX-6p-1的酶切图谱,设计了另一对特异性引物,克隆了JL-2前病毒基因组中的gp85基因片段。构建了原核表达载体PGEX-6P-1/gp85,经转化大肠杆菌BL21(DE_3)后获得高效表达。薄层扫描分析结果表明,表达产物占菌体总蛋白的31.8%。Western blott结果表明,该表达产物具有生物学反应活性,分子量约为57KD。随后,本研究以纯化后的蛋白作为抗原建立了ELISA抗体诊断方法,通过对ELISA诊断方法特异性、敏感性及对工作条件的优化试验,确定了反应的最佳程序。统计学分析51份阴性血清的检测结果,得出判定标准。相关试验结果表明,该诊断方法与鸡传染性法氏囊病等十余种禽类病毒性传染病的阳性血清无交义反应,特异性好。SPF鸡在攻毒后10天即可监测到ALV-J抗体,具有较好的敏感性。与国外试剂盒对比试验结果表明,两者具有较高的符合率。此外,同一批次抗原的批内与批间重复性试验及不同批次抗原的重复性试验结果表明,该方法具有良好的重复性。现地应用试验结果表明,某现地养鸡场3个鸡群78只、306只和92只受检鸡的检测阳性率分圳为7.6%、9.8%、59.7%;与国外ALV-J gp85 ELISA诊断试剂盒的符合率分别为89%、95.5%、86.4%。 中国农业科学院博l..论文 摘要 总之,本研究首次白东北地区分离鉴定了两株ALv一J病毒,通过遗传变异分析,获取了国内 东北地区ALV一J的分子流行病学资料。成功地表达了JL一2株gp85基因,并以其为抗原,建立了 J亚群禽白血病抗体EL工SA检测方法,为国内各养鸡场有效开展J亚群禽白血病血清学调杳、种 群净化提供了有效的技术手段,同时为开展国际间ALV一J的合作研究奠定了基础。
【学位授予单位】:

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 唐德宏;刘琴;孙玮玮;张广庆;刘绍琼;孙淑红;;泰安地区不同海兰褐商品蛋鸡群禽白血病的血清学检测[J];中国家禽;2011年15期
2 王丽;张青婵;赵鹏;武专昌;崔治中;;A和B亚群禽白血病病毒gp85基因的表达及其抗血清的亚群特异性比较[J];中国动物传染病学报;2011年03期
3 刘晓明;崔敬云;崔春红;;浅谈鸡白血病的预防[J];中国畜禽种业;2011年07期
4 曾婷婷;滕丽琼;韦平;吴天威;林广津;;2009~2011年广西肉鸡病毒性肿瘤病的检测报告[J];中国家禽;2011年14期
5 毕研丽;王金良;郭广君;杨慧;吕素芳;宋峰;苗立中;沈志强;;禽呼肠病毒套式RT-PCR检测方法的建立[J];动物医学进展;2011年08期
6 吴俊铭;任晓峰;邓小芸;王笑梅;;禽网状内皮组织增生病诊断与防制研究进展[J];畜牧兽医科技信息;2011年05期
7 倪伟;秦立廷;孙洪磊;曲悦;孙美玉;高玉龙;于宏;王笑梅;刘思当;;某海兰褐鸡场祖代、父母代及商品代鸡血管瘤型ALV-J的分离与鉴定[J];畜牧兽医学报;2011年09期
8 文正常;潘淑惠;徐景峨;高明琴;王安维;胡强;;贵州鸡淋巴性白血病血清学诊断及流行病学调查[J];中国家禽;2011年11期
9 姬希文;闫丽萍;颜丕熙;李国新;张七斤;李泽君;;鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA检测方法的建立[J];中国预防兽医学报;2011年08期
10 ;2011年国家自然科学基金部分家禽类资助项目[J];中国家禽;2011年16期
11 董嘉文;孙敏华;尚毅;胡奇林;;禽呼肠孤病毒RT-LAMP快速检测方法的建立[J];中国兽医学报;2011年07期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 秦爱建;刘岳龙;金文杰;Lucy LEE;Aly FADLY;;禽白血病病毒J亚群env基因产物的抗原性分析[A];第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2001年
2 初芹;张剑;王改利;刘华贵;;鸡白血病研究进展及种群净化[A];中国家禽科学研究进展——第十四次全国家禽科学学术讨论会论文集[C];2009年
3 秦爱建;崔治中;LEE LUCY;FADLY ALY;;抗J亚群禽白血病病毒囊膜糖蛋白特异性单克隆抗体的研制及其特性[A];中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会论文集[C];2000年
4 刘功振;张洪海;刘青;邱波;王峰;王晓伟;陈洪博;成子强;;感染J亚群禽白血病病毒的蛋鸡群中检测出B亚群禽白血病病毒[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(下册)[C];2010年
5 王彦军;孙淼;曹红;陈福勇;;禽白血病病毒自然感染及抗体变化动态规律[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
6 秦爱建;刘岳龙;金文杰;;禽白血病病毒J亚群env基因产物的抗原性分析[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年
7 杨玉莹;叶建强;赵振华;秦爱建;顾玉芳;;禽白血病病毒J亚群内蒙株的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年
8 刘青;成子强;;禽白血病病毒跨膜蛋白在膜融合及免疫抑制中的作用[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年
9 周碧君;毛君婷;罗明星;王开功;文明;程振涛;;贵州省禽白血病病毒不同亚群感染情况调查研究[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
10 顾小雪;韩雪;蔡林;张硕;李晓霞;汪葆玥;遇秀玲;翟新验;;血管瘤型J亚型禽白血病病毒的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 付朝阳;J亚群禽白血病病毒分离株变异分析及重组抗原ELISA检测方法的建立[D];中国农业科学院;2004年
2 秦爱建;禽白血病病毒J亚群囊膜糖蛋白基因的生物学和生物化学特性[D];扬州大学;1999年
3 杨玉莹;J亚群禽白血病病毒内蒙株的分离鉴定及其部分分子生物学特性的研究[D];内蒙古农业大学;2003年
4 赵冬敏;B亚群禽白血病病毒分离株的生物学特性[D];山东农业大学;2010年
5 成子强;禽白血病病毒J亚群(ALV-J)内蒙株的建立及致瘤机理的研究[D];内蒙古农业大学;2002年
6 张青婵;A亚群禽白血病病毒不同分离株的基因组和生物学特性比较[D];山东农业大学;2010年
7 张在平;荧光定量PCR检测禽白血病病毒与RNA干扰抑制J亚群禽白血病病毒复制的研究[D];内蒙古农业大学;2010年
8 吴晓平;商品蛋鸡源J亚群禽白血病病毒分离株生物学特性研究[D];扬州大学;2010年
9 邱玉玉;A亚群禽白血病病毒单克隆抗体的制备和不同亚群禽白血病病毒共感染相互影响的研究[D];山东农业大学;2011年
10 邓小芸;网状内皮组织增生症病毒LAMP检测方法及感染性分子克隆的建立[D];东北农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 冯小宇;蛋鸡J亚群禽白血病病毒的分离和部分序列测定[D];中国农业大学;2004年
2 吴永平;中国株J亚群禽白血病病毒全基因组序列的测定与分析[D];山东农业大学;2004年
3 余春明;蛋用型鸡J亚群禽白血病病毒gp85基因克隆及表达载体的构建[D];中国农业大学;2004年
4 高娃;实验性禽骨髓细胞瘤病病理学及免疫状态的研究[D];内蒙古农业大学;2002年
5 宋素泉;J亚型禽白血病JL-2株病毒的分离鉴定及gp85基因的克隆与表达[D];东北农业大学;2004年
6 朱美真;山东某地方品系鸡鸡胚中禽白血病病毒的分离及序列分析[D];山东农业大学;2010年
7 张悦;禽白血病病毒B、E和J亚群基因芯片检测方法的建立[D];河北农业大学;2012年
8 石文慧;禽B型白血病病毒生物学特性的分析及研究[D];河北农业大学;2010年
9 李传龙;J亚群禽白血病病毒相关的鸡急性纤维肉瘤人工造病试验[D];山东农业大学;2012年
10 刘功振;禽白血病病毒J亚群、B亚群的分离鉴定及核酸探针的制备[D];山东农业大学;2010年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978