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《中国农业科学院》 2004年
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利用DREB转录因子改良小麦耐盐性的研究

梁欣欣  
【摘要】:盐害是小麦生产的重要胁迫因素,我国一些地区土壤盐碱化严重,所以通过基因工程方法提高小麦的耐盐性具有重要的理论意义和应用价值。 本研究利用分子生物学的实验手段,构建了包括来源于植物拟南芥的DREB1A(Dehydration Responsive Element Binding protein,一种逆境诱导转录因子,诱导相关抗逆基因的表达)基因和用于筛选转化植株的Bar基因(编码除草剂抗性)的表达载体。 以综合农艺性状较好的小麦品种H6756的932块幼穗愈伤组织为受体,用高压氦气基因枪(PDS1000/He)将DREB1A基因导入小麦,经愈伤及分化筛选成功获得了205株再生植株。经除草剂Basta抗性筛选,其中有89株植株表现除草剂抗性。89株抗性植株再经PCR扩增和Southern杂交鉴定,其中50株植株的基因组中整合有外源基因DREB1A,转化频率达到5.36%。取31株转基因小麦的后代种子继续种植,获得的T_1代植株经分子鉴定,结果显示20个后代株系的基因组中整合有DREB1A基因,证明DREB1A基因可以在转基因后代植株中相对稳定遗传。T_1代转基因植株后代种子继续种植,获得的T_2代植株经PCR扩增和Southern杂交鉴定,4个株系中没有检测到DREB1A基因,而4个株系中DREB1A基因没有发生遗传分离,其它各株系表现不同的分离比例,进一步证明了DREB1A基因在后代中可以相对稳定遗传,并且以显性形式遗传给后代。转DREB1A基因的小麦植株经初步耐盐试验表明,其耐盐性明显高于对照植株。在盐胁迫条件下,转DREB1A基因小麦植株叶片的细胞表面糖蛋白层较为致密,而对照植株叶片的细胞表面糖蛋白层出现细胞壁外缘脱落现象。 将DREB1A基因利用农杆菌介导法导入小麦H6756中。以小麦幼苗的茎尖分生组织为转化受体,与农杆菌共培养后共获得247棵转化幼苗,经除草剂初步筛选,有66棵转化幼苗存活。经PCR扩增鉴定,其中30棵幼苗证明整合有DREB1A基因,转化率达到12.1%。 本研究利用优化的基因枪和农杆菌介导两种基因转化体系,较好地克服了小麦转化受体的基因型障碍,提高了小麦的基因转化效率,获得了耐盐性增强的转DREB1A基因小麦。
【学位授予单位】:中国农业科学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S512.1

【引证文献】
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1 张辉;通过DNA family shuffling技术获得植物强耐盐Na~+/H~+逆向转运蛋白基因NHXFS1[D];华东师范大学;2012年
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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【共引文献】
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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7 康乐;吴成君;叶兴国;徐惠君;杜丽璞;马有志;;葡萄糖氧化酶基因转化小麦的研究[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
8 吴成君;康乐;叶兴国;徐惠君;杜丽璞;马有志;;转Bcl、Rip基因小麦的鉴定与遗传分析[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
9 刘录祥;赵林姝;梁欣欣;郑企成;刘强;王晶;郭会君;赵世荣;陈文华;;基因枪法获得逆境诱导转录因子DREB1A转基因小麦的研究[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王庆莲;苹果多胺和脯氨酸合成代谢相关基因的功能鉴定[D];山东农业大学;2009年
2 种培芳;荒漠植物红砂、白刺和沙拐枣抗旱指标及抗旱性综合评价研究[D];甘肃农业大学;2010年
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4 孙国清;不同抗虫棉品种杀虫蛋白表达研究及影响抗虫性分析[D];新疆农业大学;2010年
5 盖玉红;盐生和中生植物对盐害的响应及其抗性结构机制研究[D];东北师范大学;2010年
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7 韩莹琰;白菜花粉发育相关的C2H2型锌指蛋白新基因BcMF20的克隆与功能验证[D];浙江大学;2011年
8 徐兆华;基因芯片数据统合分析方法的若干拓展[D];浙江大学;2010年
9 童旭宏;抗草甘膦棉花突变体R1098的选育及其抗性机理研究[D];浙江大学;2011年
10 何影;引入甘氨酸甲基化合成甜菜碱途径提高黑麦草抗旱性研究[D];山东大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘红梅;农杆菌介导百子莲抗寒基因CBF1高效转化体系的建立[D];华中农业大学;2010年
2 詹菁;百合AGAMOUS同源基因的克隆、载体构建及遗传转化[D];华中农业大学;2010年
3 彭英;水稻脯氨酸累积相关基因多样性及与苗期耐盐性关系[D];华中农业大学;2010年
4 李秋丽;4个狗牙根品种(系)的耐寒性评价[D];华中农业大学;2010年
5 朱冬梅;盐碱胁迫下星星草(Puccinellia tenuiflora)根部转录应答的初步分析[D];哈尔滨师范大学;2010年
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7 黄聪;花生中DREB、bZIP类转录因子耐逆性研究[D];哈尔滨师范大学;2010年
8 冯玖玲;杜氏盐藻RbcS基因家族新成员的克隆及功能研究[D];郑州大学;2010年
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10 王悦琳;过表达玉米ZmMPK7转基因烟草耐盐性研究[D];山东农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国博士学位论文全文数据库 前6条
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5 张志宏;苹果叶片离体再生不定芽及遗传转化的研究[D];沈阳农业大学;1996年
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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8 姜世民;体外定向进化大肠杆菌β-半乳糖苷酶和农杆菌介导DREB1A基因转化苹果的研究[D];南京农业大学;2003年
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【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 徐开杰;史丽丽;刘曙东;奚亚军;;农杆菌浸种处理对小麦种子萌发及幼苗生长发育的影响[J];西北植物学报;2011年05期
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中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 王维;利用农杆菌介导的幼穗法将水稻OsDREB2.2基因导入小麦的研究[D];河北农业大学;2012年
2 胡晓晴;农杆菌介导的小麦芽生长点和分蘖节遗传转化研究[D];河北农业大学;2012年
3 陶丽莉;小麦幼胚农杆菌转化体系优化和HMW-GS基因转化研究[D];中国农业科学院;2009年
4 黄振;辣椒遗传转化体系的构建及其在CabZip2、CaLRR、CaP等候选基因RNAi载体遗传转化中的应用[D];福建农林大学;2009年
【二级参考文献】
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【相似文献】
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3 贺忠群;贺超兴;张志斌;邹志荣;;丛枝菌根真菌提高植物耐盐性研究进展[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
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5 张可炜;连立君;郭宁;吕素莲;;转betA基因棉花增强甜菜碱的合成能力改善棉花的耐盐性(摘要)[A];中国棉花学会2009年年会论文汇编[C];2009年
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7 王丹丽;;多刺裸腹校ina macrocopa Straus)的耐盐性诱导[A];中国海洋与湖沼学会甲壳动物学分会、中国动物学会、中国海洋与湖沼学会生态学分会2000年学术研讨会论文摘要集[C];2000年
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中国重要报纸全文数据库 前10条
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7 记者 李冬玲;河南小麦“出访”东南亚[N];中国质量报;2003年
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