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《中国农业科学院》 2005年
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陆地棉TM-1再生体系的建立及其胚胎发生mRNA差异显示分析

冷春旭  
【摘要】:棉花体细胞培养再生体系的建立对棉花遗传改良及其生物工程具有重要意义。但长期以来,作为四倍体陆地棉标准系的TM-1一直没有建立再生体系。在组织培养过程中胚性愈伤组织的诱导一直是再生体系建立的一个瓶颈。过去对棉花体细胞胚胎发生的外界影响因素及体细胞胚胎发生的细胞学研究较多。因此通过对棉花体细胞胚胎发生过程中基因开放和表达等分子机制的研究,为进一步优化和完善棉花再生体系提供分子生物学基础。 本研究以陆地棉标准系(TM-1)下胚轴为材料,通过不同培养条件地系统优化,建立了TM-1的再生体系,并获得了再生植株。本实验进一步以棉花下胚轴、愈伤组织和胚性愈伤组织为材料,应用cDNA-AFLP技术研究胚胎发生过程中mRNA的差异表达,主要研究结果如下: 1、陆地棉标准系TM-1再生体系的建立 以7日龄的下胚轴为外植体在2,4-D浓度为0.01mg/L、IAA浓度为0.01mg/L和KT浓度为0.01mg/L,琼脂浓度为6g/L,蔗糖浓度3%的MS培养基上培养40天诱导出愈伤组织,且愈伤组织生长状态较好为黄色疏松颗粒状。 将愈伤组织接种在不同激素配比的MS培养基上进行继代培养,直到胚性愈伤组织的形成,但分化率仍然很低。活性炭对于胚萌发成苗具有促进作用,在分化培养基中加入2克活性炭能有效促进胚状体的发生,减少褐化现象。 胚状体在MS培养基+1~5倍B5维生素+3%蔗糖+0.1mg/LIAA+0.1mg/L 6BA上诱导成苗。再生植株的移植采用劈接法进行嫁接。 2、陆地棉标准系TM-1胚胎发生相关cDNA片段的克隆 利用cDNA-AFLP技术,探讨了陆地棉标准系TM-1下胚轴、愈伤组织和胚性愈伤组织在mRNA水平上的差异表达。利用180对引物组合,对合成的cDNA进行了AFLP分析,得到3000多个片段,经过两次重复筛选,能够重复再现其差异的引物有16对,而其余引物在三个材料之间差异不明现。克隆了差异片段,并进行了序列测定和同源性分析,利用BlastN与GenBank库中的核苷酸序列比较,结果表明,四个差异片段同已知陆地棉和雷蒙德氏棉中花器官及纤维发育有关的EST序列高度同源,其相似性程度达到90%以上。这些结果说明,棉花在形态建成早期(胚胎发育阶段),其特定器官的相关基因已经表达。
【学位授予单位】:中国农业科学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S562

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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8 叶纨芝;曹家树;余小林;崔辉梅;黄鹂;向珣;陶甦;;白菜核雄性不育两用系不育株系的细胞学观察[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年
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10 朱根发;吕复兵;陈明莉;王碧青;;一品红体细胞胚胎发生与植株再生[A];花卉研究20年——广东省农业科学院花卉研究所建所20周年论文选集(1984-2004)[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前4条
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【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【相似文献】
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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8 本报记者  黄秦平;废纸回收再生体系亟待完善[N];消费日报;2006年
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9 吴顺;籼稻成熟胚再生体系的建立及反义waxy基因转化籼稻的研究[D];湖南农业大学;2005年
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 冷春旭;陆地棉TM-1再生体系的建立及其胚胎发生mRNA差异显示分析[D];中国农业科学院;2005年
2 吴世秀;棉花不同杂交类型后代主要性状的遗传效应比较分析[D];河南科技学院;2010年
3 郑风敏;陆地棉F_2与F_(2:7)重组近交系群体图谱比较[D];西南大学;2010年
4 王力华;棉花黄萎病毒素诱导表达的陆地棉cDNA序列的克隆与定位[D];中国农业科学院;2003年
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7 张伟;陆地棉重组近交系中G6主要农艺性状的QTL定位[D];中国农业科学院;2010年
8 栾启福;陆地棉三种主要病害的遗传特性及其相关性研究[D];浙江大学;2003年
9 王威;利用F_2及其衍生群体定位陆地棉产量和纤维品质性状QTL[D];西南大学;2010年
10 蒋小燕;陆地棉显性无腺体基因Gl_2~e的分子标记[D];中国农业科学院;2002年
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