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《中国农业科学院》 2005年
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微生物除草剂菌种的原生质体融合研究

赵航  
【摘要】:杂草化学防治是现代农业的发展标志,它节省劳动力、有利于机械化作业、是节本增效的最重要措施。但农药污染是我国影响范围最大的一种有机污染,我国每年使用农药的面积在2.8亿公顷以上,每年使用的农药量在50-60万吨,其中除草剂年使用量为12.5-15万吨。平均有80%的农药直接进入环境,扩散到大气和土壤中,影响地下水和地表水水质。无论是出口农产品,还是国内需求的农产品,农药残留的门槛将愈来愈高,大幅度减少农药的使用是未来农业发展趋势。发展微生物除草剂,实现杂草生物防治,可以大幅度降低化学除草剂的用量,为生态安全和粮食安全,以及有害生物的可持续控制作出贡献。 突脐蠕孢(Exserohilum monoceras,EM)与弯孢(Curvularia lunata,CL)是中国水稻研究所从自然感病的稗草上分离得到的两株病原真菌,它们是稗草生物防治的潜力菌。EM对稗草致病力强,但孢子产量低,而CL孢子产量高,但对稗草的致病力弱。本研究根据这两个菌株的特性,采用灭活原生质体融合技术,对突脐蠕孢与弯孢进行原生质体的融合及融合子的筛选,目的是期望培育成功孢子产量高、代谢产毒能力强、适合工业化发酵的优良工程菌株。 论文获得以下主要研究结果: 1.采用紫外线诱变处理EM菌和CL菌,用含制霉菌素和放线菌酮的抗性培养基平板筛选获得具有抗生素抗性的突变菌株。 2.确定了原生质体制备与融合的最佳条件:EM菌静置培养24h和CL菌静置培养18h,培养菌丝体;用2%蜗牛酶+2%溶壁酶复合酶酶解4h,制备原生质体;选择再生培养基Re3,提高原生质体再生率:紫外照射4min灭活CL菌,55℃水浴5min灭活EM菌,PEG(MW4000)40%浓度、pH7.5条件下促融。成功获得3株融合子F1、F2和Rc。 3.观察到融合子在孢子形态和菌落形态上与亲株比较存在明显差异,融合子的生长速度和孢子产量等生物学特性介于两亲株之间。并利用RAPD-PCR方法分析鉴定了融合子的DNA多态性,初步鉴定出融合子Rc具有双亲的DNA条带特征。融合子F2对稗草根长的抑制效果显著高于出发菌株CL菌,而与EM菌的效果相当。
【学位授予单位】:中国农业科学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S482.4

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
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2 张人杰;;微生物除草剂致病菌的致病力比较[J];科技致富向导;2012年17期
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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【共引文献】
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10 王国英;玫瑰孢链霉菌代谢通量分析及戊糖磷酸途径改造[D];天津大学;2010年
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3 谭雯雯;猪β-防御素2多克隆和单克隆抗体的制备及初步应用[D];华中农业大学;2010年
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9 项宜娟;纤维床固定化酪丁酸梭菌产丁酸的研究[D];浙江理工大学;2010年
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【同被引文献】
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【二级引证文献】
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7 郑重谊;白菜病害生防多功能工程菌株的构建[D];湖南农业大学;2007年
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中国期刊全文数据库 前10条
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10 朱昌雄,谢德龄,粟燕,倪楚芳;利用原生质体融合技术选育农抗120高产菌株及应用的研究[J];中国生物防治;1990年01期
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