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表达多种外源基因的鸡痘病毒载体疫苗构建及免疫学评价

王云峰  
【摘要】:鸡痘病毒(Fowlpox virus, FPV)在病毒学、免疫学和疫苗学研究领域扮演了十分重要的角色,并在禽类疾病的控制上发挥了重要的作用,有不少的禽类病原保护性抗原基因在鸡痘病毒表达系统中获得了表达,显示了良好的应用前景。本研究中,构建了一系列重组鸡痘病毒(Recombinant fowlpox virus, rFPV),分别表达传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)S1基因(rFPV-IBVS1)、表达鸡γ-干扰素(Chicken interferon gamma, ChIFN-γ)基因(rFPV-ChIFNγ)、共表达IBV S1基因和ChIFN-γ基因(rFPV-ChIFNγS1)、共表达传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus, ILTV)gB基因和新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)F基因(rFPV-gBF),并对外源基因的表达情况和重组病毒免疫学特性进行了研究。 将112只4周龄SPF鸡分为7个组,分别免疫S-FPV-017株亲本鸡痘病毒、rFPV-IBVS1、rFPV-ChIFNγS1、rFPV-ChIFNγ、IB弱毒疫苗、rFPV-ChIFNγ和IB弱毒疫苗(rFPV-ChIFNγ+H120,分点同时接种),并设PBS对照,免疫后4周,用IBV LX4株攻击。结果,15/16的鸡免疫rFPV-ChIFNγS1后能够获得保护,其次是rFPV-ChIFNγ+H120组,14/16免疫鸡能够获得保护,rFPV-IBVS1免疫组和IB弱毒疫苗免疫组的保护率分别为12/16和13/16;rFPV-ChIFNγS1和rFPV-ChIFNγ+H120免疫后能够缩短IBV呼吸道排毒时间及病毒抗原在肾脏组织中存在时间,仅在攻毒后的4~6d和7~10d可分别在喉拭子和肾脏组织中检测到病毒和病毒抗原,比rFPV-IBVS1免疫组和IB弱毒疫苗免疫组分别缩短了2d和3d。IB弱毒疫苗和重组鸡痘病毒免疫组肝、脾、肾、肺和气管的病理变化轻微,rFPV-ChIFNγS1免疫组和rFPV-ChIFNγ+H120免疫组仅能在攻毒后的第7~10d观察到病理变化,比rFPV-IBVS1免疫组和IB弱毒疫苗免疫组攻毒后病变持续时间短了3d。试验鸡的血清学和外周血T淋巴细胞亚群的监测表明,疫苗接种后3周全部试验鸡均为IBV抗体阳性,其中,IB弱毒疫苗免疫组抗体水平最高,其次是rFPV-IBVS1免疫组和rFPV-ChIFNγ+H120免疫组,rFPV-ChIFNγS1免疫组的抗IBV抗体水平是最低的:除了rFPV-ChIFNγS1免疫组CD4~+T淋巴细胞攻毒前下降较为明显,TCRγδ~+和CD8~+T淋巴细胞比例是最高的外,其余各组外周血TCRγδ~+、CD4~+和CD8~+T淋巴细胞变化均比较平稳。上述结果说明,ChIFN-γ促进CD8~+T细胞的成熟,抑制外周血中CD4~+T细胞数量,提高了机体的细胞免疫水平,限制了机体B淋巴细胞的活化以及特异性抗体的产生;与此同时,ChIFN-γ还能抑制活疫苗免疫接种引起的试验鸡增重降低作用,含有ChIFN-γ基因的免疫组试验鸡的增重没有受到疫苗接种的影响,与rFPV-IBVS1免疫组、IB弱毒疫苗免疫组有显著差异(P0.05)。 为了评估rFPV-gBF的免疫效果,将74只4周龄SPF鸡分为6个组,分别免疫rFPV-gBF、ND弱毒疫苗(La Sota株)、S-FPV-017、ILT弱毒疫苗和鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗(rFPV-ILTVgB),并设立PBS对照,免疫4周后分别用NDV F48E9株和ILTV WG株进行攻击,比较基因工程疫苗与常规弱毒疫苗对ILT和ND的保护效果。结果,rFPV-gBF免疫SPF鸡后能够抵抗NDV和ILTV强毒的攻击,其对ILTV的保护效果与ILT弱毒疫苗和rFPV-ILTVgB相当,对NDV的死亡保护也达到4/6。以不同剂量的rFPV-gBF免疫试验鸡后,在50PFU到


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