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《中国农业科学院》 2008年
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转Xa21基因抗病水稻抗优97特异性检测技术研究

马玉婷  
【摘要】: 我国转基因水稻研究发展迅速。转Xa21基因抗病水稻已经批准进行生产性试验,即将进入产业化种植阶段。本文以转Xa21基因抗病水稻抗优97为实验材料,研究获取了其外源DNA插入特征序列,并以此为基础建立了转Xa21基因抗病水稻抗优97转化事件特异性检测方法,同时还对水稻内源参照基因筛选、植物叶绿体DNA的PCR检测在转基因检测中的应用以及DNA提取方法等进行了探讨。论文主要研究内容和结论有以下四个方面: 1.水稻内源参照基因的筛选。经试验验证,本实验室设计的PEPCex基因引物在水稻中具有种内一致性,和其它物种间具有特异性,检测灵敏度达0.04 ng,在不同植物中未发现非特异性扩增,可作为转基因水稻检测的内源参照基因。 2.转Xa21基因抗病水稻抗优97特异性检测方法的研究。利用20对引物的反复PCR扩增及部分巢式PCR扩增验证,从抗优97水稻中获得了长度为2700 bp的外源载体骨架插入序列;利用TAIL-PCR方法获取了该序列左右边界的侧翼序列,结果表明其两侧侧翼序列均发生了重组,具有转化事件特异性。分别针对上述2段侧翼序列,筛选出2对转化事件特异性检测引物,建立了抗优97转化事件特异性检测方法,检测灵敏度分别为0.05%和0.1%;本文还建立了针对特异性检测和内源参照基因检测的二重复合PCR反应体系;并构建抗优97特异性检测标准分子,可用作抗优97特异性PCR检测阳性对照。 3.植物叶绿体trn基因通用引物在转基因植物及其产品检测中的应用。实验证明,利用植物叶绿体trn基因通用引物,可以快速区分多成分样品中不同植物成分,同时trn基因通用引物检测灵敏度高,可作为辅助方法,用于深加工产品检测。 4.DNA提取方法的比较研究。对CTAB法、SDS法、改良CTAB法、改良SDS法四种不同水稻基因组DNA提取方法进行比较,四种方法均可提取出符合PCR检测要求的水稻基因组DNA,其中CTAB法适合于大部分水稻材料,改良CTAB法更适合于稻谷DNA提取和后续的PCR检测。
【学位授予单位】:中国农业科学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:S511

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【引证文献】
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【同被引文献】
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