收藏本站
《中国农业科学院》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

紫花苜蓿抗褐斑病基因的ISSR、SRAP以及AFLP分子标记研究

王瑜  
【摘要】: 苜蓿(Medicago sativa L.)是重要的蛋白饲料,被誉为“牧草之王”。由苜蓿假盘菌(Pseudopeziza medicaginis (Lib.) Sacc.)引起的褐斑病是苜蓿最常见和破坏性很大的病害之一。抗病新材料的选育和使用是防治苜蓿褐斑病最经济、有效的办法。本研究以五个品种苜蓿的抗、感株系,中抗×中抗组合,(抗×感)×感BC1群体为实验材料,利用BSA法结合ISSR、SRAP以及AFLP三种分子标记技术筛选与苜蓿抗褐斑病基因连锁的分子标记,旨在为苜蓿抗褐斑病种质材料的快速鉴定以及苜蓿抗褐斑病的分子标记辅助选择育种奠定基础,同时,也根据BC1群体抗、感单株的分离情况对苜蓿抗褐斑病遗传规律做探索性研究。本项研究取得的主要结果如下: 1、通过优化影响紫花苜蓿(Medicago sativa. L)ISSR-PCR的主要参数,建立适于紫花苜蓿的ISSR反应体系和扩增程序。在20μL体系中各反应物的最适含量为:15 ng模板DNA,0.2 mmol/L dNTP,0.4μmol/L ISSR引物,0.8 U Taq DNA聚合酶,2μL 10×PCR Buffer,1.5 mmol/L MgCl2,2.5%去离子甲酰胺。PCR扩增程序为:94℃预变性4 min,94℃变性30 s,62℃(62℃~58℃)退火45 s,72℃延伸1 min 45 s,共11个循环,每个循环退火温度降1℃; 94℃变性30 s,52℃(52℃~48℃)退火45 s,72℃延伸1 min 45 s,共24个循环;72℃延伸5 min,25℃保温。 2、用伊鲁瑰斯、萨兰斯、沙湾、沙河、泾阳五个品种苜蓿的抗、感株系分别建立各自的抗、感病DNA池,通过ISSR标记研究,得到与抗褐斑病基因相关的ISSR标记4个,分别为ISSR6-S640、ISSR22-S450、ISSR22-S660与ISSR834-R450。 3、通过接种鉴定,在以上五个品种苜蓿的抗、感株系中,筛选出高抗单株6株,高感单株6株,中抗单株4株,通过相互间杂交,配置高抗×高抗组合6个,高感×高感组合6个,高抗×高感组合21个,中抗×中抗组合4个,对各组合后代进行接种鉴定,筛选出优良高抗×高抗组合2个,高感×高感组合2个,高抗×高感组合1个,中抗×中抗组合1个,将其作为进一步试验的研究材料或者作为苜蓿抗褐斑病育种的原始材料。 4、以中抗×中抗群体为试验材料,通过SRAP标记研究,获得与抗褐斑病基因连锁的SRAP标记1个,命名为M3E3-R169,该标记与抗褐斑病基因间遗传距离为11.75 cM。经克隆测序,发现该标记片段中的6~157号碱基序列与紫花苜蓿谷氨酰胺合成酶基因的3855~4006号碱基具高度一致性,同一性高达97%,横跨该基因11号表达子与间隔子序列。 5、对两个BC1群体进行接种鉴定,其抗、感单株分离比均符合为3:1的分离比例,结合高抗×高感F1群体多数为抗病单株的表现,初步推断苜蓿褐斑病为单显性基因控制,可能存在多个微效基因共同作用。 6、对BC1群体进行AFLP标记分析,得到与褐斑病抗或感病基因连锁的分子标记三个,分别为M1P1-R206、M2P8-R185和M5P6-S264,其在群体抗、感单株中分子标记检测的正确率分别为91.2 %、89.2 %与95.7%,与抗病基因的遗传距离分别为8.95 cM、10.95 cM与4.35 cM。经对三个标记的克隆测序,发现三个片段均与截形苜蓿的一些克隆片段具有很高的同源性。 本研究鉴定出的四个苜蓿抗褐斑病分子标记,将为苜蓿抗褐斑病种质资源的鉴定以及抗褐斑病育种提供分子标记辅助选择的依据,会提高选择效率,缩短育种年限。同时,本研究中所建立的BC1群体还可用于紫花苜蓿遗传图谱的构建。
【学位授予单位】:

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 朱猛蒙;马锐;张蓉;;刈割对紫花苜蓿病虫害的影响[J];中国植保导刊;2006年12期
2 苏丽明,黄建龙;紫花苜蓿引种栽培试验的研究[J];农村实用科技信息;2001年01期
3 王祺,王永斌;荒漠绿洲区紫花苜蓿生产技术的研究[J];草业科学;2002年02期
4 柴洪生,郭宪,王宏;紫花苜蓿拌种“富思德”根瘤菌剂的效果[J];内蒙古草业;2005年01期
5 张令进;朱树森;;无棣紫花苜蓿[J];农业知识;1997年09期
6 张美玉!221700;果园种植紫花苜蓿[J];林业科技通讯;2001年07期
7 秦红林;如何种植紫花苜蓿[J];农业科技与信息;2003年07期
8 何学谦;;中国荷斯坦奶牛紫花苜蓿中毒的诊治[J];畜牧与兽医;2005年12期
9 王良文;;紫花苜蓿喂猪效果好[J];农家科技;2007年11期
10 ;紫花苜蓿[J];农村养殖技术;2009年08期
11 李福荣;金录学;马再义;张桂玲;;紫花苜蓿在干旱山区的种植技术[J];中国牛业科学;2011年01期
12 俞火明;;紫花苜蓿在不同刈割期的矿物质和化学成份[J];草原与草坪;1985年01期
13 王宏;紫花苜蓿接种根瘤菌的效果[J];中国草食动物;1986年05期
14 郜玉田;张雪艳;;紫花苜蓿高产栽培技术[J];现代畜牧兽医;1988年02期
15 刘东海;紫花苜蓿栽培技术[J];内蒙古农业科技;1995年06期
16 郭彦军,徐恢仲,张家骅;紫花苜蓿根系形态学研究[J];西南农业大学学报;2002年06期
17 储国良,丁剑英,付反生,王敬根,王全洪,刘亚柏;南方丘陵坡地紫花苜蓿施肥效应初探[J];中国乳业;2002年05期
18 耀卫青;薄素梅;高丽丽;米美玲;;紫花苜蓿病虫害防治技术[J];农药市场信息;2003年21期
19 王鑫;陇东紫花苜蓿的栽培与田间管理技术[J];草业科学;2004年08期
20 丁晖兵,杨丽敏;庆阳市紫花苜蓿栽培管理应注意的几个环节[J];甘肃农业;2004年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘瑞峰;张新全;严欢;张斌;王利宝;刘卫东;;12个紫花苜蓿引进品种产量及持久性评价[A];第三届中国苜蓿发展大会论文集[C];2010年
2 赵金梅;周禾;王育青;孙启忠;;灌溉对北京地区紫花苜蓿生产性能的影响[A];第三届中国苜蓿发展大会论文集[C];2010年
3 杨茁萌;;紫花苜蓿营养与质量评价[A];第四届(2011)中国苜蓿发展大会论文集[C];2011年
4 荆刚;朱玉春;刘伯方;宁志霞;;紫花苜蓿在城市绿化中的作用[A];辽宁省昆虫学会2006年年会论文集[C];2006年
5 高婷;张晓刚;纪立东;Orson Boyce;Stanford A.Young;朱建宁;彭文栋;;美国优质紫花苜蓿在宁夏中部干旱区适应性研究[A];第三届中国苜蓿发展大会论文集[C];2010年
6 戚志强;玉永雄;;重庆地区紫花苜蓿生产性状间相关性研究[A];第三届中国苜蓿发展大会论文集[C];2010年
7 王晓娜;卢欣石;;紫花苜蓿抗寒高产性能比较研究[A];第三届中国苜蓿发展大会论文集[C];2010年
8 郭正刚;包爱科;刘慧霞;;紫花苜蓿人工草地水肥管理研究进展[A];第三届中国苜蓿发展大会论文集[C];2010年
9 陈艳;乔璟;沈益新;;紫花苜蓿根系性状与春季地上部生长的相关性分析[A];第四届(2011)中国苜蓿发展大会论文集[C];2011年
10 李扬;孙洪仁;丁宁;刘治波;邵光武;沈月;;紫花苜蓿根系生物量[A];第四届(2011)中国苜蓿发展大会论文集[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 和静县农业技术推广站 屈涛 顾健 楼爱玲;紫花苜蓿夏季主要管理技术措施[N];新疆科技报(汉);2006年
2 杨莉 韩万勇;紫花苜蓿高产栽培技术[N];新疆科技报(汉);2005年
3 ;金皇后[N];中国畜牧报;2004年
4 曹闻;紫花苜蓿播种前种子如何处理[N];中国畜牧报;2004年
5 张郎;紫花苜蓿的收获制度[N];中国畜牧报;2004年
6 吕海英;林西绿色产业撑起农区“畜牧天”[N];中国畜牧兽医报;2005年
7 李纲陵 郝丽娟;宁县1.5万亩紫花苜蓿引领农民增收[N];陇东报;2008年
8 本报记者 霍雪梅通讯员 戴燕山 旋若飞;山里人的“幸运草”[N];河北经济日报;2008年
9 文/李文选;进口紫花苜蓿[N];山西科技报;2001年
10 侯平军;玉米褐斑病的发生和防治措施[N];河南科技报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 胡华锋;硒在土壤—苜蓿—饲料—蛋鸡系统中的迁移效应及其机理研究[D];华中农业大学;2011年
2 王瑜;紫花苜蓿抗褐斑病基因的ISSR、SRAP以及AFLP分子标记研究[D];中国农业科学院;2009年
3 何树斌;不同氮素和水分供应下紫花苜蓿碳同化和C/N响应机制研究[D];兰州大学;2012年
4 徐博;朝鲜碱茅P5CS基因的克隆及其转化紫花苜蓿的研究[D];中国农业科学院;2012年
5 曾昭海;紫花苜蓿高效根瘤菌筛选及田间鉴定方法研究[D];中国农业大学;2003年
6 金太成;大豆DREB基因GmDREB1改良紫花苜蓿耐盐性的研究[D];东北师范大学;2010年
7 温洋;磷钾营养对紫花苜蓿(Medicago Sativa L.)产量和品质的影响及相关机理研究[D];中国农业科学院;2005年
8 郭彦军;紫花苜蓿对酸性紫色土的适应性及其营养特性研究[D];西南农业大学;2005年
9 春亮;基于EPIC模型的紫花苜蓿生长模拟研究[D];中国农业科学院;2007年
10 寇建村;断根对紫花苜蓿生理生态效应的影响研究[D];西北农林科技大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 谢勇;坝上地区紫花苜蓿施肥研究及其土壤养分丰缺指标体系的初步建立[D];四川农业大学;2010年
2 张彩峡;低温弱光对紫花苜蓿根颈生理生化指标影响研究[D];西北农林科技大学;2010年
3 丁旺;紫花苜蓿3个开花相关基因的克隆与初步鉴定[D];中国农业科学院;2011年
4 姜义宝;钙对紫花苜蓿抗旱性影响的研究[D];东北农业大学;2003年
5 邱勤;根际微生态水平上酸铝胁迫对紫花苜蓿-根瘤菌体系的影响[D];西南大学;2011年
6 刘志鹏;不同耐盐性状紫花苜蓿的SSR分子标记研究[D];西北农林科技大学;2004年
7 陈丽;紫花苜蓿雄性不育突变体的筛选及其细胞学观察[D];兰州大学;2010年
8 王楠;盐碱胁迫对紫花苜蓿生长及磷素吸收的影响[D];兰州大学;2011年
9 纳钦;紫花苜蓿和缘毛雀麦高光谱与营养成分的相关性研究[D];内蒙古农业大学;2010年
10 张文杰;紫花苜蓿化感作用研究[D];中国农业科学院;2010年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978