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《中国农业科学院》 2010年
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伯氏疏螺旋体三种检测技术的研究

杨吉飞  
【摘要】: 莱姆病是由媒介蜱传播伯氏疏螺旋体感染引起的一种自然疫源性人畜共患细菌性疾病,该病损害人和动物的多个组织器官。感染伯氏疏螺旋体的人和动物经历莱姆病的多个病程,呈现不同的临床症状。莱姆病作为最普遍的媒介传播人畜共患疫病之一,在世界各地广泛分布,对公共卫生安全提出了严峻的挑战,其危害已日益受到人们的关注。 国内对该病的研究相对较少,基于伯氏疏螺旋体不同国家和地区分离株差异比较显著以及伯氏疏螺旋体自身的一些特点,本研究针对该病对其分子及血清学检测方法进行了初步的研究。 参考GenBank中已经发表的伯氏疏螺旋体的基因序列,基于16S rRNA基因序列设计通用引物,建立了检测伯氏疏螺旋体的LAMP方法;与衣原体、支原体和立克次氏体、巴贝斯虫、泰勒虫等常见蜱传播的病原之间没有交叉反应。与参考的PCR方法进行比较,该LAMP方法有很好的敏感性,参考的PCR方法对狭义伯氏疏螺旋体、阿氏疏螺旋体以及伽氏疏螺旋体DNA的检测敏感性分别为1pg、1pg和0.1pg;LAMP方法分别为0.2pg、0.2pg和0.02pg。应用建立的PCR和LAMP方法对110份野外收集蜱的基因组进行检测,PCR检出率为15.5%,而LAMP检出率为32.7%。应用建立的LAMP方法,对采自我国部分地区的不同蜱种进行检测,结果显示,革蜱中伯氏疏螺旋体的感染率为28.6%、血蜱的感染率为36.5%、牛蜱的感染率为61.0%、扇头蜱的感染率为54.9%。 根据国内主要流行的伯氏疏螺旋体菌株的3个基因型(狭义伯氏疏螺旋体、阿氏疏螺旋体和伽氏疏螺旋体),基于OspA基因设计特异性引物,建立了可以进行基因分型的LAMP方法;特异性分析表明其种间没有交叉反应,且与衣原体、支原体和立克次氏体、巴贝斯虫、泰勒虫等常见蜱传播的病原之间也没有交叉反应。敏感性分析发现,狭义伯氏疏螺旋体、阿氏疏螺旋体和伽氏疏螺旋体的特异性引物对其相应的菌株进行扩增的敏感性分别为2ng、0.2ng和0.02ng。结果表明,该LAMP分型方法有较好的特异性,能够用于我国主要流行的狭义伯氏疏螺旋体、阿氏疏螺旋体和伽氏疏螺旋体这3个基因型菌株的分型鉴定,但是本方法的敏感性相对较低,不适于对野外样品的检测。 用体外培养的狭义伯氏疏螺旋体B31菌株,制备全菌抗原,建立了羊莱姆病血清学检测的间接ELISA,该方法对莱姆病的阳性检出率和阴性符合率分别可以达到90.1%和90%,与羊支原体、布鲁氏菌、弓形虫、乏质体、巴贝斯虫、泰勒虫等病原的阳性血清之间没有交叉反应。应用该方法对甘肃省甘南地区采集的450份羊血清进行检测,结果显示:夏河县、临潭县和卓尼县羊的莱姆病感染率分别为3.3%、6.1%和4.1%,平均感染率为5.1%,推断该地区可能为莱姆病的自然疫源地。
【学位授予单位】:中国农业科学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S854.43

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【参考文献】
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