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《中国农业科学院》 2010年
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鸡TLR4信号通路与肠炎沙门氏菌感染关系的研究

宋咏梅  
【摘要】: 控制和解决沙门氏菌感染一直是家禽育种和生产中的难题。TLR4信号通路在介导沙门氏菌跨膜信号转导和激发机体免疫系统中发挥主要作用。本研究通过在中外鸡种中对TLR4基因主要编码区进行遗传变异研究,寻找具有不同突变频率的SNP位点。以SPF鸡为素材进行基因分型,在人工感染肠炎沙门氏菌的条件下,比较不同基因型之间信号通路重要传导分子的mRNA表达量和介质水平的差异,确定不同TLR4基因型及其调控的信号通路对于激发机体对抗感染的差异,筛选对沙门氏菌感染具有显著遗传效应的分子遗传标记,为家禽抗病育种提供理论依据。 试验一:TLR4基因变异研究。以9个地方鸡种(北京油鸡、白耳鸡、溧阳鸡、河南斗鸡、泰和乌骨鸡、大骨鸡、狼山鸡、仙居鸡、茶花鸡)和3个引进品种(隐性白羽肉鸡、科宝鸡、来航蛋鸡)为素材,利用DNA直接测序技术对TLR4蛋白基因的全部外显子、部分内含子及5’调控区共4373 bp的序列进行了单核苷酸多态性检测。结果共检测到36个SNPs,其中19个SNPs位于编码区(cSNPs),12个集中于第三外显子的特定区域上(蛋白的TRR结构域);10个为错义突变,21个为新发现的SNPs。根据检测结果,基于第三外显子上的13个SNP,对12个群体进行基因分型,以检测它们是否受到自然和人工选择的作用和品种间是否存在差异。不同基因型及等位基因在12个鸡品种间分布存在显著的差异,推测与该基因的功能存在相关。 试验二:TLR4不同基因型对抗沙门氏菌感染的差异比较。在试验一的基础上,选择在多品种发生突变、位于TLR4重要结构域的两个突变位点903和1832开展基因型差异的比较。以400只1日龄SPF来航蛋鸡为素材,按2位点的组合基因型(TT/GG,GG/AA和GT/GA)分为三个组即A、E和F组,每组35只,饲养于隔离仓中。在21日龄时肌肉注射鸡肠炎沙门氏菌(SE)悬液108CFU 0.5mL/只,于感染后1d、2d、3d、4d、和5d进行免疫学指标和盲肠组织基因表达的测定。结果表明:(1)SE感染后造成雏鸡精神沉郁,体温变化;血清IgG浓度、IL-1和IL-6水平在感染后均有上调。三组相比,A组在1、2、3DPI时的IgG、IL-1和IL-6水平显著高于E、F组(P0.05)。(2)感染后第1天,盲肠组织的TLR4、MyD88和NF-κB的表达量明显高于以后几天。三组相比,在感染的1、2、3DPI,A组TLR4、TRAF6和NF-κB基因的表达量均显著或极显著高于E、F组(P0.05),和炎性介质IL-1、IL-6水平表现一致。由此提示,TLR4蛋白基因中该两个位点的氨基酸改变,可能会引起TLR4与沙门氏菌结合效率的改变,进而影响信号通路传递效率的改变,从而引起机体对抗感染反应的不同,TT/GG组合基因型表现一定的优势效应。
【学位授予单位】:中国农业科学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S858.31

【参考文献】
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