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《中国原子能科学研究院》 2001年
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时间分辨荧光免疫分析研究

吴冯波  
【摘要】: 近二十年来,非放射性同位素免疫分析(Non-radioisotopic immunoassay,NRIA)得到了迅猛的发展。时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)作为NRIA的一种重要方法,除了具有分析灵敏度高、测量范围宽、精密度好等优点外,在多元待测物免疫分析(Multi-analyte immunoassay,MAIA)方面更具有独特的优势。 与传统的免疫分析方法不同,MAIA指通过一次加样、一次分析,同时对样品中二种或二种以上待测物进行测定(定量、半定量或定性)的免疫分析方法。MAIA可采用多探针标记法、单一探针空间识别法、双探针空间识别法等多种方式。多探针标记法通过对不同探针信号进行识别实现MAIA;而空间识别法则通过检测不同区域的探针信号实现MAIA。免疫分析以准确、快速、经济、简便为目的,MAIA为实现这一目的提供了一条途径。 以稀土离子(Re)络合物的配基作为标记物的TRFIA克服了传统有机荧光分子和稀土离子标记物的固有缺点,已逐渐成为新一代极具吸引力的分析技术之一。国内外多个研究机构在这一领域的大量工作为发现新的具有更佳综合性能的配基标记物提供了前提。 本论文分为三个部分,分别为综述、双标记血清TSH/TT4 TRFIA方法的建立和β-二酮类荧光络合物配基的合成研究。 论文的综述部分简略地介绍了免疫分析的一般原理和几种不同类型免疫分析的方法学特点,重点讨论了与血清TSH/TT4 TRFIA紧密相关的以下内容:1)TRFIA的特点和实施方式;2)影响免疫分析灵敏度的因素;3)MAIA的原理和实践。 论文的第二部分旨在以Eu~(3+)/Sm3+为标记物建立血清TSH/TT4 TRFIA。我们首先采用考察了建立血清TT4 TRFIA多种不同模式和改善血清TSH TR-IFMA灵敏度的多种途径,这些工作为建立血清TSH/TT4 TRFIA提供了经验和数据。在上述工作的基础上,我们通过‘共包被’方式制备了高活性的固相抗TSH和抗T4抗体,以Eu3+/Sm3+为标记物建立了快速、灵敏、可靠的血清TSH/TT4 TRFIA。 论文的第三部分旨在合成能应用于TRFIA的β二酮类标记物配基。我们成功合成了多种不同的配基标记物,分析了其结构与其Eu3+络合物荧光性能的关系,初步摸索了其在TRFIA中的应用方式,并简单地讨论了以配基为标记物的TRFIA的一般问题。 通过上述工作,我们得到了如下结论: 1)以抗原包被方式建立血清TT4 TRFIA要求有较大的固相抗原包被量。 2)以固相第二抗体(S-Ab)为分离试剂建立的血清TT4 TRFIA,要求固相S-Ab对抗T4抗体有足够的俘获容量(Capturing capacity),否则,TT4测量值将受到基质效应的干扰而出现明显偏差。论文推荐了一种新的制备高活性固相链亲合素(SA)的方法,以固相SA作为分离试剂建立的TT4 TRFIA有效地消除了样品基质的干扰现象。 摘 要 3)以马来酚亚胺-疏基法制备了链亲合素-多聚赖氨酸复合物侣AF(l* 以 DTTA-Eu“标记SAI 不能得到稳定的标记试剂;而以DTPAA(二亚乙基三 胺五醋酸配)为双功能螫合试剂能对SA巾(l)进行有效标记。采用SAI*ly(l- ,EU’“能明显提高*SHThJ*M人的荧光强度,但由于非特异背景荧光的明显升 高,使用 SAIOly(l>Eu”未能改善 TSH TRIFMA的分析灵敏度。 4)分别以鹰吩甲酚三氟丙酮(TT和苯甲酚三氟丙酮田TA)k能量供体配制了二种 共荧光增强液④FES卜在相同的仪器测量参数下,CFES对Eu”的荧光增强作 用约为 Wllac FESqluorescence enhnement solutioll)的 6-25倍。CFES对配制 试剂的纯度要求极高,增强离子个“中的极微量的杂质(特别是Eu”和sd勺能引 起显著的背景荧光。我们将背景较高的CFES应用于TSH TRJFMA,未能改善 TSH TRIF讪的分析灵敏度。。 5)二种检测抗体联用并采用生物素-亲合素信号放大体系能明显地提高血清TSH TR-IFMA的特异荧光信号,并将非特异荧光控制在较低的范围,因而有效地提 高了 TSH TR-IFMA的灵敏度。在此基础上建立的血清 TSH TR-IFMA的分析灵 敏度达0刀03 mlU/l。对临床样品的分析结果表明,本工作建立的超灵敏血清 TSH TRIFMA对甲亢病人和甲功正常病人的区分明显优于IRMA(免疫放射分析,分 析灵敏度:0刀4 IYinJ八)。 6)采用 Eu勺’“为标记物建立了血清 TSW TrIA。以‘共包被’方式制备了 高活性的固相抗TSH和抗T4 McAb,这种‘共包被’方式对于建立其它MAIA 有一定参考意义。 7)我们将h个TTA单元峰吩甲酚三氟丙酮)整合到同一分子中,制备了h种新的 多合螫合剂-fHazine-TTA和BTOT。由于Tiazine-TTA的-NH进入络合物配 位内层而产生了明显的荧光淬灭效应:而STOlEu”络合物能发出很强的荧光, 其检测下限达 9.gX 10一‘molfl。 8)通过二乙酞基三联苯与三种全氟取代竣酸乙酯的 Claisen缩合制备了三种具有高
【学位授予单位】:中国原子能科学研究院
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:O657.3;R392-33

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【引证文献】
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1 狄燕清;;时间分辨荧光在免疫分析中的应用[J];商洛学院学报;2011年06期
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1 郭淑英;固相时间分辨荧光免疫分析螯合物的制备及固相白色不透明样品池的研制[D];吉林大学;2006年
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1 曲晓春;时间分辨荧光免疫分析双功能联吡啶型螯合剂中间体的合成与表征[D];东北师范大学;2007年
2 刘晓利;固相时间分辨荧光免疫分析仪样品池的研制和应用[D];长春理工大学;2009年
3 狄燕清;免疫分析方法研究与不透明样品池的修饰[D];长春理工大学;2010年
【共引文献】
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1 黄小华,王新民;稀土在真丝绸染色中作用机理探讨[J];安徽机电学院学报;2000年02期
2 叶信宇,汤新亮,万玉宝,王修然,孙益民;人工神经网络用于含茂基苯并三氮唑基镧系金属有机配合物分解温度的预报[J];安徽师范大学学报(自然科学版);2004年04期
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10 王巍,叶一秀,颜光涛,姚昊,李洪敏,孙立群,王安生,李楠,陈红兵,林明贵,王金河,盛莉;严重急性呼吸综合征(SARS)患者血清白介素-8测定及其评价[J];标记免疫分析与临床;2004年01期
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1 赵海峰;熊万斌;黄晓华;杨成;陈明清;;多响应性聚合物微球的制备与光学性质研究[A];第六届中国功能材料及其应用学术会议论文集(5)[C];2007年
2 李松;孙洪颖;;荧光偏振免疫分析实验仪的研制[A];第六届全国高等学校物理实验教学研讨会论文集(下册)[C];2010年
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1 周彬;介孔材料MCM-41组装体的光学性能研究[D];长春理工大学;2010年
2 侯智尧;几种稀土含氧酸盐发光材料的静电纺丝法制备及性能研究[D];哈尔滨工程大学;2009年
3 赵丽芳;芳香羧酸类稀土配合物的合成、表征及性质研究[D];陕西师范大学;2010年
4 冯勋;基于含氮杂环多羧酸稀土配位聚合物的设计、合成、结构与性能研究[D];西北大学;2011年
5 邬洋;SiO_2@(Zn,Sr)_2SiO_4: Re~(3+)(Re=Eu,Dy)材料制备及发光性能研究[D];北京交通大学;2011年
6 张道军;稀土有机—无机杂化纳米发光材料的制备与发光性能研究[D];吉林大学;2011年
7 白凤英;含有生物分子的f/d金属配合物的制备与性能研究[D];吉林大学;2011年
8 张逢春;肿瘤标志物检测方法及药用植物羊蹄品质生态学研究[D];吉林大学;2011年
9 蒋文;基于敏感电极界面及电活性纳米探针构建的高灵敏电流型免疫传感器的研究[D];西南大学;2011年
10 张爱江;多足羧酸配体及其稀土、碱土金属配合物的合成、结构及性能研究[D];兰州大学;2011年
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1 喻翠翠;猪结合珠蛋白单克隆抗体的制备及初步应用[D];华中农业大学;2010年
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3 沈荣星;过滤金属铁氰化物修饰电极的制备及其电化学生物传感的应用[D];安徽师范大学;2010年
4 闫冠峰;三种新型铕的有机配合物光物理特性及机理研究[D];江南大学;2010年
5 李凡正;微生物油脂型润滑油基础油的制备及相关油脂摩擦学性能的初步探索研究[D];武汉工业学院;2010年
6 袁艳梅;镧负载粉煤灰基吸附剂深度处理稀土冶炼氨氮废水[D];昆明理工大学;2010年
7 尹凯;BaHfO_3:Ce闪烁陶瓷粉体的制备及性能[D];沈阳大学;2010年
8 王华栋;溶胶—凝胶法制备BaHfO_3:Ce~(3+)闪烁陶瓷粉体及其性能[D];沈阳大学;2010年
9 刘柱;稀土复合氧化物ReeTi_2Al_9O_(19)的制备及性能研究探索[D];中国地质大学(北京);2011年
10 王红红;甘胆酸(CG)在妊娠及其合并症中的监测价值[D];山西医科大学;2011年
【同被引文献】
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1 陈泮藻,郭庆福,詹轶群;时间分辨荧光分析测定细胞活性和破膜法实验研究[J];标记免疫分析与临床;1998年02期
2 黄飚,肖华龙,朱利国,谭成,蔡刚明,金坚;CA19-9时间分辨荧光免疫分析方法的建立及应用[J];标记免疫分析与临床;2001年01期
3 肖华龙,蔡刚明,黄飚,朱利国,谭成,纪书仁,金坚;CA125时间分辨免疫荧光分析法及其临床应用[J];标记免疫分析与临床;2001年02期
4 朱艳冰,李庆阁,王桂兰,袁景利;新型铕络合物用于HBsAg的时间分辨荧光免疫检测[J];标记免疫分析与临床;2002年03期
5 朱岚,黄飚,张祥瑞,裴豪,刘海燕,李跃松,肖华龙;铁蛋白时间分辨荧光免疫分析法的建立[J];标记免疫分析与临床;2005年02期
6 刘婷婷;宁志刚;赫文龙;李俊玲;张树恒;潘利华;;固相时间分辨荧光免疫分析的标记技术及标记过程中的蛋白质测定[J];标记免疫分析与临床;2009年02期
7 王蕾,吴英松,汤永平,李明;应用时间分辨荧光免疫分析技术检测SARS病毒抗原的初步研究[J];第一军医大学学报;2005年04期
8 潘利华,马世盐,赵文杰,林敏,栾玉成,恽勤;稀土铕离子标记抗乙型肝炎表面抗体[J];分析化学;2000年11期
9 齐为民,刘茂贤;时间分辨荧光免疫法临床应用新进展[J];光电子技术与信息;1994年05期
10 吴冠英;时间分辨荧光免疫分析仪器进展[J];光电子技术与信息;1994年05期
【二级引证文献】
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1 狄燕清;;稀土标记轮状病毒抗体的研究[J];商洛学院学报;2012年04期
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2 潘利华,杜继贤,谢文兵,杜庆洋,恽勤;时间分辨激光荧光光谱技术在免疫分析中的应用[J];光谱学与光谱分析;2000年03期
3 陈泮藻,李振甲;稀土元素标记技术及在免疫分析中的应用[J];生物化学与生物物理进展;1990年04期
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6 李伟峰,刘海东,汪晓莲,李澄,邵明,陈宏芳,许咨宗,汪兆民,伍健,曾晖,黄胜利;快时间分辨MRPC性能研究[J];中国科学技术大学学报;2004年02期
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9 叶彤,崔岩,侯建敏,陈耀东,于振宝,唐崇钦,王水才,匡廷云,侯洵;高等植物光系统Ⅱ反应中心的亚纳秒时间分辨荧光光谱的测量[J];光子学报;1996年01期
10 田振,郭周义,贾雅丽;时间分辨荧光免疫分析及其在临床检测中的应用[J];激光生物学报;2002年04期
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1 李丽华;杨金易;沈玉栋;孙远明;;恩诺沙星时间分辨免疫分析方法的建立[A];2010第二届中国食品安全高峰论坛论文集[C];2010年
2 王晓芳;邱若沂;谢平波;赵福利;许宁生;汪河洲;;ZnO纳米多晶颗粒的受激发射及时间分辨特性[A];2006年全国光电技术学术交流会会议文集(C 激光技术与应用专题)[C];2006年
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5 张吉龙;卢红;谭有恒;王焕玉;王辉;吴超勇;张慧敏;;对羊八井ARGO实验大厅自然温度环境的监测[A];Workshop on ARGO-YBJ Experiment--Proceeding of CCAST (World Laboratory) Workshop[C];2002年
6 黄泽伟;;“时间分辨”定量检测乙肝“二对半”的临床应用——附8000例检测结果分析[A];第四届全国临床检验学术会议论文汇编[C];2006年
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8 葛惟锟;;砷化镓中缺陷阴极荧光的时间分辨研究[A];第三次中国电子显微学会议论文摘要集(二)[C];1983年
9 杨国洪;吴泽清;张继彦;丁永坤;杨家敏;胡昕;李军;;ICF黑腔靶激光等离子体的时间分辨电子温度诊断[A];第十五届全国原子与分子物理学术会议论文摘要集[C];2009年
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1 宋曙煌;时间分辨荧光技术转化“第一人”[N];上海科技报;2008年
2 《中国物理学报》 供稿;飞秒激光测量纳米尺度超快物理过程[N];大众科技报;2007年
3 记者 王素琴;气象“奥运星”仗剑护“神七”[N];中国气象报;2008年
4 泳沩;双功能螯合剂研制成功[N];吉林日报;2008年
5 潘昕;我国将研制天文卫星[N];中国航天报;2000年
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8 石明山郑原驰;我国首次合成新型双功能螯合剂[N];中国化工报;2008年
9 上海海成投资公司 韩洪宇;细化交易行为 量化市场因素[N];期货日报;2007年
10 袁琳;陈章良会见加拿大免疫化学药剂有限公司总裁萧浩博士[N];广西日报;2008年
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1 吴冯波;时间分辨荧光免疫分析研究[D];中国原子能科学研究院;2001年
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6 董志宁;乙型肝炎病毒表面抗原光激化学发光免疫测定试剂及人类免疫缺陷病毒时间分辨荧光免疫检测试剂的研制[D];南方医科大学;2012年
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9 张倩云;原发性肝癌肿瘤标志物化学发光酶免疫分析方法及应用研究[D];北京化工大学;2011年
10 尹东光;吖啶酯DMAE·NHS的合成及TSH和TT_4化学发光免疫分析的研究[D];中国原子能科学研究院;2002年
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1 钮庆良;时间分辨光谱技术在免疫分析中的应用[D];长春理工大学;2010年
2 田振;时间分辨荧光免疫分析技术及测试仪的研究[D];华南师范大学;2003年
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4 郝岩;免疫分析激发荧光强度仪设计[D];中国科学技术大学;2010年
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10 曹熙杰;固相时间分辨荧光免疫分析螯合剂中间体的合成[D];长春工业大学;2012年
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