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食品中转基因作物溯源体系及相关检测技术研究

雍凌  
【摘要】:目的 建立一个全面的转基因作物信息数据库,并以数据库为基础开发转基因作物溯源和直报软件系统,可以对转基因作物研发和流通的信息进行全程管理和动态收集,与全程标识体系相结合,形成食品中转基因作物的溯源体系。同时,研究加工食品中转基因作物外源基因的提取和快速筛选方法,为食品中转基因作物的溯源提供技术支持。 方法 1食品中转基因作物溯源体系研究 使用Microsoft SQL Server 2000系统、基于JDK1.5环境的JAVA语言和hibernate+spring+struts开发框架,建立起一个数据库和软件系统,再通过搜集国内外文献、数据库、专利信息和各国的审批文件和管理文件,获得现有的转基因作物相关信息,填充到数据库中,并依据数据库开发溯源和直报软件。 2溯源相关检测技术研究 首先利用高温(电磁炉和微波炉加热)将生物样品处理后,提取其DNA进行PCR (polymerase chain reaction,聚合酶链式反应)定量分析,来比较加工前后DNA的变化;同时比较酚氯仿法、基因组DNA纯化试剂盒法、磁珠法和离心柱法提取DNA的效果;针对五种市场化的转基因玉米(MON810、Bt11、NK603、59122和1507),选择5对公共元件和5对功能基因的引物,并把多个基因整合到同一个pGEM(?)-T质粒上,作为转基因快速筛选的阳性对照,同时用C#语言、Hibernate框架和SQL Server系统开发出配套的结果判断软件,从而研制出快速筛选试剂盒。 结果 1食品中转基因作物溯源体系研究 建立了转基因作物信息数据库,目前已收集到在世界上已上市和已获批准证书的转基因玉米46种,转基因水稻7种,转基因大豆11种,转基因小麦7种,超过30条外源DNA序列,400余条商业化信息,提供321个审批文档的下载,215种核酸检测方法,53种内参基因检测方法,39种蛋白检测方法,4种标准物质,涉及4个物种的18条内参基因。转基因作物信息数据库与溯源和直报软件可以通过注册用户、提交信息来对数据库中的信息进行更新。 2溯源相关检测技术研究 加工后DNA片段明显降解;基因组DNA纯化试剂盒提取DNA的浓度最高,且操作方便、污染小,适于提取加工食品的DNA;在转基因玉米快速筛选的过程中,转基因玉米样品中均检测出了相应的外源基因,而非转基因玉米则没有出现假阳性结果;在结果判断软件中选择筛选出的基因,能迅速准确地查询出相应的转基因事件;10对引物针对相应目标DNA和阳性对照质粒的灵敏度均在0.1%以下。 结论 1食品中转基因作物溯源体系研究 转基因作物信息数据库包含全面的转基因作物相关信息,以数据库为基础开发的的转基因作物溯源和直报软件系统能对数据库信息进行有效管理和及时更新,为管理部门提供了一种便捷的转基因作物全程动态管理的技术平台,也为相关领域提供了一个了解转基因作物信息的有效工具。 2溯源相关检测技术研究 加热煮沸导致DNA降解,提示加工食品中DNA的检测应当选择较短的目标片段;基因组DNA纯化试剂盒法可以用作加工食品中DNA的提取方法;转基因玉米快速筛选试剂盒以及配套的结果判断软件,可以对MON810、Bt11、NK603、59122和1507五种转基因玉米的制品及含有这些转基因玉米的产品进行快速的筛选检测。


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