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《中国中医科学院》 2011年
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黄金方治疗外感病的研究

何萍  
【摘要】:外感病是由于外邪侵袭人体而导致的一类病证,大多数起病较急,初起常伴有发热等临床表现,多具有传染性、流行性和季节性等特征。流行性感冒和手足口病是常见的季节性、传染性疾病,均由病毒感染引发,具有起病急,进展快的特点,临床以发热、恶寒、全身不适等为主要表现。根据二者发病机理及临床特征,可将其归为中医外感病范畴。 黄芩、金莲花是临床上常用的两种清热解毒类药物。黄芩善清上焦肺热,多用于治疗感冒、咳喘等疾病的中药方剂中,具有良好的临床疗效。现代研究表明,黄芩及其主要活性成分黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等具有抗氧化、清除自由基、抗炎、抗肿瘤、抗病毒等多种药理作用。一些学者针对黄芩苷对流感病毒的作用进行了研究,结果表明黄芩苷在体内体外实验中均具有抑制流感病毒的作用,对我国分离的甲型流感病毒神经氨酸酶具有抑制活性的作用。金莲花也是临床经验用药,在外感热证等病证的治疗中具有独特疗效,同时,其抗菌、抗病毒、抗炎等药理作用也已得到证实。综上所述,根据临床用药经验,结合药理学研究成果,我们选取黄芩、金莲花两味药物进行组合制成黄金方,力求将其开发成一种对流感及手足口病等外感病证具有确切治疗作用的中药新药。黄金方中君药黄芩具有清热燥湿,泻火解毒之功效,臣药金莲花味苦,性寒,可助黄芩清热解毒之力,两者配伍共奏清热解毒之功。根据二药临床用药经验及药理学研究成果,我们将黄金方的研究重点放在对以流感和手足口病为主的外感病的治疗上,从体内体外抗病毒、抗菌,抗炎,解热等多方面评价黄金方治疗外感病的作用,力求为黄金方治疗流感、手足口病等外感病证提供可靠的实验依据。 在提取工艺研究中,我们采用HPLC法对黄芩单味药提取、金莲花单味药提取、黄金方复方提取三种方法所得提取物主要有效成分黄芩苷、荭草苷进行含量测定,通过比较单味药提取与复方共同提取两种方法所得提取物中黄芩苷、荭草苷的含量,优选黄金方药物提取的较佳工艺,实验结果显示:单味药提取与复方共同提取两种方法所得提取物中黄芩苷、荭草苷的含量相近,结合工业生产条件及成本,确定以60%乙醇回流提取3次,每次1小时,固液比为1:10对黄金方药物进行复方提取为黄金方粗提物生产的较好工艺。 在用药安全性研究中,我们通过小鼠急性毒性试验(最大给药量实验)观察黄金方的急性毒性反应,实验结果显示:黄金方对ICR小鼠灌胃的最大给药量为172.8g/kg(按生药折算),相当于成人临床用量(30g/60kg/天)的345.6倍,口服无明显毒性,安全性较高。 在药效学研究中,我们对黄金方体内外抗病毒作用、体内外抗菌作用、免疫调节作用、抗炎、解热作用进行了全面评价,主要包括以下内容: 1、采用滴鼻感染正常小鼠和免疫低下小鼠建立流感病毒感染肺炎模型,分别采用治疗和预防性给药,观察黄金方对小鼠肺指数、死亡率、生存时间的影响,评价黄金方对甲型H1N1流感FM1株和PR8株感染的防治作用。实验结果表明,黄金方对正常免疫状态和免疫低下小鼠肺部炎症有明显的治疗和预防作用,并可减少死亡率、延长生存时间,是防治甲型H1N1流感的有效药物。 2、采用甲型H1N1流感病毒FM1株感染正常小鼠肺炎模型,进一步研究黄金方对流感病毒FM1株感染小鼠肺组织病毒载量、IFN-γ水平,以及免疫功能的影响,探讨黄金方抗流感病毒作用及其作用机制。实验结果表明,黄金方可明显降低流感病毒FM1株感染小鼠肺组织病毒载量,提高肺组织中IFN-γ水平,调节血清中CD1+、CD8+细胞数量,使CD1+/CD8+比值趋于正常,其改善肺部炎症的作用机制可能是通过调节小鼠免疫功能抑制流感病毒FM1株在小鼠肺组织中的复制来实现的。 3、通过腹腔注射EV71病毒的方法感染乳鼠,观察黄金方对乳鼠感染病毒后一般状况、死亡率、生存时间的影响,评价黄金方对EV71感染的治疗作用。实验结果表明,黄金方能减少EV71感染后乳鼠的死亡数、延长平均存活天数,对EV71病毒感染引发的幼鼠死亡有一定的保护作用。 4、采用细胞病变效应法(CPE)观察黄金方体外对流感病毒、其他多种常见呼吸道病毒、EV71病毒的抑制作用。实验结果表明,黄金方体外对甲型H1N1流感病毒PR8株、brisbane/59/2007株、甲型H3N2流感病毒brisbane10株、乙型流感病毒江西修水株、HSV-1、Ad7等多种呼吸道病毒引起的细胞病变具有一定的抑制作用,对甲型H1N1流感病毒FM1株、PIV-1、RSV、Ad3、EV71无明显的抑制作用。 5、通过考察黄金方对甲型H1N1流感病毒brisbane/59/2007株神经氨酸酶(NA)活性的影响,进一步探讨黄金方抗流感病毒的作用机制。实验结果表明,黄金方具有抑制流感病毒神经氨酸酶活性的趋势,但与病毒对照组比较无显著差异,其抑制流感病毒brisban/59株的作用机制可能与降低神经氨酸酶活性有关。 6、通过研究黄金方对金黄色葡萄球菌致小鼠死亡的保护作用,探讨黄金方的体内抗菌作用。实验结果表明,黄金方可减少小鼠感染金黄色葡萄球菌后的死亡率,延长小鼠存活时间,对金黄色葡萄球菌感染小鼠死亡具有明显的保护作用。 7、选用多种呼吸道感染、肠道感染常见的病原菌和条件致病菌,通过体外抑菌实验研究黄金方的抗菌作用。实验结果表明,黄金方在体外对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、肺炎链球菌、卡他球菌、绿脓杆菌有不同程度的抑菌作用。对大肠杆菌、肺炎杆菌、白色念珠菌体外生长无明显的抑制作用。 8、采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进、角叉菜胶致大鼠足跖肿胀等几种不同的急性炎症动物模型,对黄金方抗炎作用进行探讨。实验结果表明,黄金方对二甲苯导致的小鼠耳廓肿胀、醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性亢进、角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀均有一定的抑制作用,可抑制炎症早期毛细血管扩张引发的渗出增加、组织肿胀,具有明显的抗炎作用。 9、采用干酵母致大鼠发热模型、内毒素致家兔发热模型,对黄金方解热作用进行评价,实验结果表明,黄金方对干酵母致大鼠发热模型、内毒素致家兔发热模型均具有明显的解热作用。 以上研究结果证实,黄金方口服安全性高,具有体内外抗病毒、抗菌作用,免疫调节作用,抗炎、解热作用,其药理作用针对外感病病因、病理变化及临床特征等各个方面,对以流感为代表的外感病证具有明显的治疗作用。与西药相比,其治疗作用确切,药用资源丰富,用药成本低廉,值得在临床实践中开发和应用。其对手足口病的治疗作用,还有待进一步实验及临床研究考察。
【学位授予单位】:中国中医科学院
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R254

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