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《中国中医科学院》 2012年
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中药提取物的活性筛选和“一测多评”技术在中药中的应用

张锴镔  
【摘要】:一、中药提取物的活性筛选 本研究选取卫生部2002年2月28日下发的《既是食品又是药品的物品名单》及《可用于保健食品的物品名单》中的21种中药,分别用水/醇提取制备了22个提取物进行5个方面的活性筛选,以期寻找到具有抗老年性痴呆、降糖及降脂作用的中药。实验中采用酶活性测定法,测定乙酰胆碱酯酶、A-beta积聚、hIAPP积聚、α-葡萄糖苷酶及脂肪酶等抑制效力的方法,分别以毒扁豆碱、姜黄素、阿卡波糖、奥利司他为阳性对照。实验结果显示,淫羊藿提取物下显示出较强的乙酰胆碱酯酶抑制作用,其抑制率为41.34%(毒扁豆碱抑制率为100%);淫羊藿、香附、天麻、红景天及金樱子药材提取物显示出了较强A-beta积聚抑制作用,其活性抑制率分别为52.63%、62.58%、50.70%、46.86%、48.36%(姜黄素抑制率为66.78%);绞股蓝提取物显示出一定的hIAPP积聚的抑制活性,抑制率为47.41%(姜黄素抑制率为70.82%);蒲黄、菟丝子、山药、香附、红景天及刺五加提取物显示出一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性,其抑制率分别为27.57%、31.34%、28.17%、26.72%、26.98%、29.40%(阿卡波糖抑制率为69.76%);香附、红景天提取物还显示出一定的脂肪酶抑制活性,抑制率分别为40.74%和60.63%(奥利司他抑制率为95.45%)。本实验为进一步发现中药中新的乙酰胆碱酯酶抑制剂、A-beta积聚抑制剂、hIAPP积聚抑制剂、α-葡萄糖苷酶抑制剂及脂肪酶抑制剂积累了数据,并为开发具有抗老年性痴呆、降糖及降脂等作用的保健品及药品提供了参考。 二、“一测多评”技术在中药中的应用 中药多成分、多功效的作用特点使得单指标的质量控制难以全面反映中药的内在质量,多成分同步质量控制势在必行。在实际工作中,多成分同步质量控制需要提供足量的对照品;而中药对照品的难以分离或化学单体不稳定导致对照品的供应量不足,使得单一成分的质量控制尚存在一定的难度,多指标的质量控制更是受到限制。“一测多评”技术的提出为解决这类问题提供了一个新的思路。目前“一测多评”技术已在黄连、丹参、吴茱萸等20多味常用中药材的应用中得到验证,其中黄连的“一测多评”方法已被2010年版《中国药典》收录。 1、“一测多评”技术在淫羊藿及复方制剂中的应用 首先,以淫羊藿药材中淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及宝藿苷-Ⅰ为指标,建立淫羊藿药材中上述5个黄酮类成分的HPLC同步测定方法。采用C18色谱柱,以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,检测波长270nm,柱温35℃。在此条件下,5种成分的分离度良好。在以下线性范围内0.000784~0.392μg,0.000844~0.422μg,0.000804~0.402μg,0.000784~0.392μg,0.000820-0.410μg,线性关系良好,相关系数均大于0.9999。其加样回收率为98.69%~101.7%,RSD为1.8%-2.5%,表明该方法的准确度良好。其次,建立了朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及宝藿苷-Ⅰ与内参物淫羊藿苷间的相对校正因子和采用相对保留值对待测成分进行定位的方法,分别为:f朝藿定A/淫羊藿苷270nm=0.73,f朝藿定A/淫羊藿苷270nm=0.80朝藿定C/淫羊藿苷270nm=0.81,f宝藿苷-I/淫羊藿苷270nm=1.37和r朝藿定A/淫羊藿苷=0.69,r朝藿定B/淫羊藿苷=0.78,r朝藿定C/淫羊藿苷=0.90,r宝藿定-I/淫羊藿苷=1.71。同时对相对校正因子的耐用性做了考察,重点考察了不同仪器、不同色谱柱、流速、柱温、修饰剂等因素的微小变化对相对校正因子的影响。结果表明,在对色谱条件进行微调的情况下,相对校正因子的重现性和耐用性良好(RSD5%)。最后,分别采用外标法和“一测多评”法测定19批淫羊藿药材及20批炙淫羊藿中5种黄酮类成分的含量,采用相对误差法对测定结果进行评价。结果表明,“一测多评”法的测定结果与外标法的测定结果无显著差异,相对误差均5%。说明在缺乏对照品的情况下,“一测多评”技术可以应用于淫羊藿药材及炙淫羊藿的多指标质量控制。 在测定的19批药材和20批炙淫羊藿中,5种黄酮类成分含量的差异较大,即使是同一产地的药材,其含量也有较大差异。19批药材中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷及宝藿苷-I的平均含量分别为0.91±0.30,1.21±0.47,3.72±3.85,185±0.91,0.62±0.40mg·g-1;20批炙淫羊藿中上述5种黄酮类成分的平均含量分别为:0.86±0.39,1.13±0.56,1.42±1.34,1.97±1.07,0.63±0.35mg·g-1。从平均值看,淫羊藿药材中的朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的含量略高于炙淫羊藿中的含量,淫羊藿苷的含量略低于炙淫羊藿中的含量,而宝藿苷的含量二者基本相当。 将建立的淫羊藿黄酮“一测多评”质量评价模式直接应用于中成药抗骨增生胶囊的质量评价,以朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷及宝藿苷-I作为检测指标,方法学考察结果,其精密度、稳定性、重复性、加样回收率均符合中药质量分析的要求。试验中采用外标法(ESM)和一测多评法(QAMS)对9批抗骨增生胶囊中上述4个黄酮类成分的含量进行了测定,并用相对误差法对测定结果进行评价。结果显示,2种方法的测定结果无显著性差异,相对误差小于5%。结果表明,淫羊藿黄酮类成分的QAMS质量评价模式在中成药抗骨增生胶囊多成分同步质量评价中的适应性良好。在色谱条件满足中药质量分析要求的前提下,该模式可直接用于含淫羊藿制剂中黄酮类成分的质量控制。 2、“一测多评”技术在新清宁片中的应用 将文献报道的大黄蒽醌类成分的“一测多评”质量评价模式直接应用于中药制剂新清宁片的质量评价,仅采用大黄素单一对照品实现了对新清宁片中典型成分大黄素、大黄酸、大黄酚及大黄素甲醚等4个大黄葸醌类成分的同步测定。通过与ESM所得结果的比较,发现QAMS的计算值与外标法的实测值之间无显著性差异,相对误差小于5%,表明文献报道的大黄蒽醌类成分间的相对校正因子(f大黄酸/大黄素254nm=1.13,f大黄酚/大黄素254nm=1.46,f大黄酸甲醚/大黄素254nm=1.01)及相对保留值(rf大黄酸/大黄素=0.66,rf大黄酚/大黄素=1.41,r大黄酸甲醚/大黄素254nm=1.94)准确、可靠。在色谱条件满足中药质量分析要求的前提下,上述参数可直接用于含大黄制剂中大黄蒽醌类成分的质量控制。
【学位授予单位】:中国中医科学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R284

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