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《中国中医科学院》 2007年
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荆芥种质资源评价与种子质量标准研究

高峰  
【摘要】: 本论文共包括五部分内容,第一部分介绍了ISSR技术的原理、特点及其应用,裂叶荆芥研究进展;第二部分为裂叶荆芥遗传多样性研究;第三部分为裂叶荆芥芥穗化学成分高效液相指纹图谱比较研究;第四部分为裂叶荆芥芥穗中有效成分胡薄荷酮含量测定;第五部分为裂叶荆芥种子质量标准研究。 第一部分:ISSR分子标记技术及裂叶荆芥研究进展 ISSR技术具有操作简单、成本低、快速、灵敏、检测多态性能力强、所需DNA模板的量少等特点,广泛应用在药用植物DNA指纹图谱构建,遗传多样性考察等方面;文章综述了近10年关于荆芥研究的文献,荆芥的研究重点多集中在化学、药理、炮制等方面,遗传多样性方面的研究尚属空白。 第二部分:裂叶荆芥遗传多样性研究 荆芥为唇形科植物裂叶荆芥Schizonepeta tenuifolia Briq.的干燥地上部分,味辛、微苦,性微温,归肺、肝经。具有祛风、解表、透疹、止血功能。主治感冒发热,头痛,目痒,咳嗽,咽喉肿痛,麻疹,风疹,臃肿,疮疖,炒炭后治衄血,吐血,便血,崩漏,产后血晕。 荆芥在我国分布广泛,主产于江苏、浙江、山西、河北、湖北、湖南等省,临床多采用栽培品,在河北省安国,浙江萧山等地有多年的种植历史。由于荆芥价格随市场价格的波动很大,许多产区已经弃种,这有可能对荆芥种质资源造成了极大的破坏。由于近年来对荆芥的研究集中在化学成分、炮制和药理作用的研究,遗传多样性研究尚属空白。笔者运用简单序列间重复多态性技术(ISSR inter-simple sequence repeat)考察了不同产地的裂叶荆芥的遗传多样性,从65条引物中筛选出12条扩增条带较多、信号强、背景清晰的引物用于ISSR-PCR反应。12条引物对所有样品扩增共产生108条DNA谱带,其中多态带为55条(占50.93%),通过与潘超美、李薇等研究不同栽培居群广藿香的种内遗传多样性(多样性条带占79.76%)对比表明,裂叶荆芥的遗传多样性受到了一定程度的破坏,应当加强种质资源的保护。 第三部分:裂叶荆芥芥穗化学成分高效液相指纹图谱比较研究 荆芥芥穗中化学成分的种类和含量都高于芥穗全草,便于荆芥质量的综合考察。笔者以芥穗为考察对象,运用高效液相指纹图谱技术考察了不同产地芥穗的指纹图谱,并运用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004 A版”软件,分别对12个荆芥穗样品指纹图谱进行匹配,确定了不同产地荆芥穗指纹图谱的相似度,得到共有峰11个,确定了荆芥穗标准指纹图谱。 通过相似度的比较发现,不同产地荆芥穗中化学成分的比例变化较大,有个别产区的化学成分积累出现缺失,具体原因还需要结合环境、土壤等因素进一步考察。 第四部分:裂叶荆芥芥穗中胡薄荷酮含量测定 根据《中国药典》(2005年版一部)项下荆芥穗中胡薄荷酮含量的测定方法,运用高效液相色谱法测定了不同产地荆芥穗中胡薄荷酮含量。通过研究发现适于夏天播种的2号荆芥芥穗中胡薄荷酮含量高于适合春天播种的1号荆芥,这传统种植经验相悖;不同产地荆芥穗中胡薄荷酮含量差异较大,其中河北省安国市产安国2号荆芥穗中胡薄荷酮含量最高是药典中规定最小值的14.876倍;安国1号、安国2号、玉田2号、山东鄄城、内蒙赤峰产荆芥有效成份含量较高,有可能是其种质比较优异的原因,但是因为荆芥有效成份积累与环境密切相关,因此对各产地荆芥进行受控试验,将能够进一步说明其种质差异。 第五部分:裂叶荆芥种子质量标准研究 针对裂叶荆芥种子质量缺乏标准的现状,笔者以河北省玉田1号、玉田2号,江西省吉安裂叶荆芥种子为考察对象,对种子的质量标准进行了探讨,暂定一级种子的发芽率应达到90%以上,千粒重大于0.3g,无明显杂质,无其他种子混杂;二级种子的发芽率应达到80-90%,千粒重在0.25g左右,无较大块杂质,无其他种子混杂。研究中发现储存方式对种子质量的影响较大,应加大药用植物种子储存方式的研究。
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