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《中国中医科学院》 2010年
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灌肠方治疗溃疡性结肠炎的临床和实验研究

胡连海  
【摘要】: 溃疡性结肠炎是一种以直肠、结肠粘膜非特异性炎症、溃疡形成为主要特征的病变。临床主要表现为腹泻、里急后重、粘液脓血便、腹痛等。病程迁延,常反复发作。其病因和发病机制目前认为主要与免疫、遗传、环境等因素的相互作用有关。近年来,溃疡性结肠炎的发病率在我国有增高趋势,临床上多采用美沙拉嗪及柳氮磺胺吡啶治疗。 溃疡性结肠炎归属于中医学“痢疾”、“泄泻”、“便血”“滞下”、“肠风”等范畴。其病因病机包括感受外邪、劳倦内伤或饮食不洁、情志失调、脾肾阳虚等方面。中医治疗溃疡性结肠炎的方法主要有中药方剂内服、灌肠、中药加灌肠、中药栓剂及其它剂型局部给药、单味中药、中西药结合、针灸等。其疗效显著,无明显副作用,并且价廉,显示出中医药治疗本病的优越性和广阔的前景。中药灌肠是临床常用的治疗方法之一,灌肠可以使药物直达病所,药物利用率高,且副作用少,所以临床应用较多。 本课题历经文献研究、临床研究、实验研究三个阶段,从临床及实验研究两方面来研究灌肠方治疗溃疡性结肠炎的临床疗效及其作用机制,为中医药治疗溃疡性结肠炎提供思路。论文分为三个部分:第一部分:文献综述 1.古代中医对溃疡性结肠炎病因、病机的总结,并对其辨证论治做了系统总结。现代中医对溃疡性结肠炎病因病机的认识,对其各种治疗方法做了系统论述,为本课题的临床研究提供理论基础和依据。 2.系统论述了近年来现代医学对溃疡性结肠炎发病机理的研究进展,包括免疫因素、细胞凋亡、遗传、精神因素及环境因素的研究进展,为本课题的实验研究提供理论依据。 第二部分:灌肠方治疗溃疡性结肠炎的临床研究 目的:1.通过采用随机对照的临床试验研究,观察灌肠方对溃疡性结肠炎湿热内蕴证患者的临床疗效和安全性,为中医药治疗溃疡性结肠炎提供临床依据。2.观察灌肠方对溃疡性结肠炎患者血清D-二聚体、血小板计数和血小板平均体积的影响,探讨灌肠方发挥作用的途径,分析湿热内蕴证和血瘀证之间的联系。 方法:采用随机对照的临床试验方法,入组40例,治疗组20例,对照组20例。治疗组给予灌肠方水煎液100ml保留灌肠,每晚1次,每日一剂。对照组给予柳氮磺胺吡啶口服,500mg/次,4次/d。治疗3周后,观察临床疗效、不良反应以及治疗前后血清D-二聚体、血小板计数和血小板平均体积水平的变化。 结果:治疗组总有效率为90.00%,对照组总有效率为75.00%,治疗组疗效明显高于对照组(P0.05)。治疗组患者血清D-二聚体和血小板计数水平降低、血小板平均体积水平升高较对照组显著(P0.05)。治疗组共发生可能与药物相关的不良反应1例(5%),对照组发生可能与药物相关不良反应2例(10%),两组不良反应发生率无显著差别(P>0.05)。 结论:灌肠方治疗溃疡性结肠炎疗效显著,可能是通过清热利湿以改善瘀血状态;降低血清D-二聚体和血小板计数水平以及升高血小板平均体积水平可能是其治疗溃疡性结肠炎的机制之一。 第三部分:灌肠方治疗溃疡性结肠炎的实验研究 实验一:灌肠方对溃疡性结肠炎大鼠一般情况及结肠粘膜形态的影响。 目的:观察灌肠方对三硝基苯磺酸诱导的溃疡性结肠炎大鼠一般情况及结肠粘膜大体、病理变化的影响。 方法:取3月龄SD大鼠60只,雌雄各半,随机分为6组(正常组,空白对照组,中药低、中、高剂量组和西药美沙拉嗪对照组),每组10只。采用三硝基苯磺酸诱导法制作溃疡性结肠炎模型,造模后第3d开始给予灌胃给药,中药治疗组分别给予低、中、高剂量灌肠方水煎液,西药对照组给予美沙拉嗪,正常组及空白对照组给予等体积蒸馏水,每天1次,连续18天。观察大鼠一般情况、体重及治疗后结肠粘膜病理变化。 结果:造模后的大鼠出现粘液脓血便或稀便,自主活动减少,喜扎堆,食欲减退、倦怠懒动、反应迟缓。治疗18天后,上述情况改善,中药中、高剂量治疗组及西药对照组优于中药低剂量治疗组,各组大鼠的体重无明显差异。病理结果显示中药治疗组及西药对照组无粘膜层的坏死,仅有不同程度的炎症细胞浸润,优于空白对照组,中药中、高剂量组及西药对照组优于中药低剂量组。说明药物剂量与效果之间有一定相关性。 实验二:灌肠方对溃疡性结肠炎大鼠炎症细胞因子的影响。 目的:观察灌肠方对溃疡性结肠炎大鼠白介素-4和白介素-10的影响,探讨灌肠方在抗炎方面的作用。 方法:动物分组、造模及药物治疗同实验一,ELISA法检测各组大鼠血清白介素-4和白介素-10的水平。 结果:中药中、高剂量组和西药美沙拉嗪对照组之间无显著性差异,其余各组之间均有显著性差异(P0.05)。空白对照组大鼠血清白介素-4和白介素-10的含量明显低于正常组,各中药治疗组及西药对照组均高于空白对照组。提示灌肠方可能是通过升高白介素-4和白介素-10的水平,纠正了促炎症性细胞因子和抗炎症性细胞因子之间的失衡,发挥治疗溃疡性结肠炎的作用。 实验三:灌肠方对溃疡性结肠炎大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体的影响 目的:研究灌肠方对溃疡性结肠炎大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体mRNA水平的影响。 方法:动物分组、造模及药物治疗同实验一,RT-PCR法检测各组大鼠结肠粘膜中过氧化物酶体增殖物激活受体mRNA的水平。 结果:空白对照组大鼠结肠粘膜中过氧化物酶体增殖物激活受体基因表达明显降低,与正常组比较有显著性差异(P0.05)。中药中、高剂量组及西药对照组大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体基因表达明显升高,与空白对照组比较,有显著性差异(P0.05),而中药低剂量组与空白对照组比较,无显著性差异(P0.05)。提示灌肠方可能是通过对溃疡性结肠炎大鼠低表达的过氧化物酶体增殖物激活受体的上调,抑制NF-κB的活化,进而抑制促炎因子等炎症相关因子表达,从而抑制炎症的发生及发展,类似于过氧化物酶体增殖物激活受体激动剂的作用,这可能是灌肠方发挥作用的机理之一 实验四:灌肠方对溃疡性结肠炎大鼠核因子-κB p65的影响 目的:研究灌肠方对溃疡性结肠炎大鼠核因子-κB p65mRNA水平的影响。 方法:动物分组、造模及药物治疗同实验一,RT-PCR法检测各组大鼠结肠粘膜中核因子-κB p65 mRNA的水平。 结果:空白对照组大鼠结肠组织中核因子-K B p65基因表达明显升高,与正常组比较有显著性差异(P0.05)。中药低、中、高剂量组及西药对照组大鼠核因子-K B p65基因表达与空白对照组比较明显降低,有显著性差异(P0.05),而中药低剂量组与中药中、高剂量组比较明显增高,有显著性差异(P0.05)。提示灌肠方可能是通过对溃疡性结肠炎大鼠过高表达的核因子-K B p65的下调,抑制炎症因子的活化,减轻上皮细胞的损伤,从而抑制炎症的发生及发展。 实验五:灌肠方对溃疡性结肠炎大鼠Toll-like受体2的影响 目的:研究灌肠方对溃疡性结肠炎大鼠Toll-like受体2 mRNA水平的影响。 方法:动物分组、造模及药物治疗同实验一,RT-PCR法检测各组大鼠结肠粘膜中Toll-like受体2 mRNA的水平。 结果:空白对照组大鼠结肠组织中Toll-like受体2基因表达明显升高,与正常组比较有显著性差异(P0.05)。中药低、中、高剂量组及西药对照组大鼠Toll-like受体2基因表达与空白对照组比较明显减低,有显著性差异(P0.05),而中药低剂量组明显高于中药中、高剂量组,有显著性差异(P0.05)。提示灌肠方对溃疡性结肠炎大鼠过高表达的Toll-like受体2有下调作用,阻止核因子-κB的激活,阻止多种致病因子的跨膜信号转导,减少致炎因子的释放,抑制过度的免疫反应,发挥治疗溃疡性结肠炎的作用。 结论:灌肠方发挥作用的机制可能是:1、通过升高白介素-4和白介素-10的水平,抑制促炎因子的合成,增加抗炎因子的大量合成,纠正了促炎症性细胞因子和抗炎症性细胞因子之间的失衡;抑制淋巴细胞介导的宿主自发免疫反应,阻止炎症的发生。2、上调过氧化物酶体增殖物激活受体的水平,抑制核因子-κB的活化和Toll-like受体2的表达,抑制促炎因子等炎症性相关因子的表达和活化,阻止多种致病因子的跨膜信号转导,减轻上皮细胞的损伤,抑制过度的免疫反应。
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