丹酚酸A干预心肌缺血再灌注损伤的钙相关机制研究

【摘要】： 丹酚酸A干预心肌缺血再灌注损伤的钙相关机制研究 丹酚酸A (SAA)是唇型科植物丹参的水溶性部分丹酚酸中的主要化学成分之一,由一分子丹酚素和三分子咖啡酸缩合而成。本实验室课题组最近研究发现SAA具有抑制缺氧复氧诱导心肌细胞LDH漏出的作用,这为SAA发挥抗心肌缺血再灌注损伤作用提供了细胞水平上的依据。本课题为阐明它这一保护作用的机制,首先通过建立体外缺氧复氧心肌细胞模型来模拟心肌缺血再灌注损伤并应用MTT实验的方式,观察了SAA对心肌细胞活力的保护作用。尽管L-型钙通道的大量开放是造成钙超载的重要原因,但丹酚酸A对心肌细胞L-型钙通道的影响作用至今未见报道,因此实验部分二采用全细胞膜片钳技术来研究SAA对心肌细胞L-型钙通道电流及其动力学过程的影响作用,与此同时我们还应用活细胞自动成像系统来验证了SAA对心肌细胞内钙离子浓度的影响作用,进一步探索其抗心肌缺血再灌注损伤作用的钙离子机制。 实验部分一丹酚酸A对缺氧复氧心肌细胞活力的影响 目的研究丹酚酸A对缺氧复氧心肌细胞活力的影响 方法SynergyTM4多功能微孔板检测系统测定OD值。 结果与正常组比较,模型组心肌细胞OD值明显降低(P＜0.001)；与模型组比较,SAA各剂量组心肌细胞的OD值明显增高(P＜0.001)；SAA高中低剂量组心肌细胞OD值分别为(0.439±0.007)、(0.395±0.008)、(0.367±0.019)。 结论SAA可浓度依赖性的对抗缺氧复氧损伤维持细胞活力。 实验部分二丹酚酸A对大鼠心肌细胞L-型钙通道的阻滞作用 目的研究丹酚酸A对大鼠心肌细胞钙通道的影响作用。 方法全细胞膜片钳技术。 结果丹酚酸A浓度依赖性的阻断I-CaL, SAA10-6,10-5,10-4,10-3mol/L对I-CaL峰电流的抑制率分别为(16.23±1.3)%(n=6,p0.05), (22.9±3.6)%(n=6,p＜0.05), (53.4±3.0)%(n=8,p＜0.01), (62.26±2.9)%(n=6,p＜0.01),其IC50为3.83×10-5mol/L; SAA10-5,10-4mol/L能使I-V曲线明显上移,激活曲线明显右移,但不改变失活、恢复曲线的形状。 结论丹酚酸A可浓度依赖性的阻断心肌细胞钙通道电流。 实验部分三丹酚酸A对心肌细胞内游离钙离子浓度的影响 目的研究丹酚酸A对大鼠心肌细胞内钙离子浓度的影响作用。 方法活细胞自动成像系统(显微荧光测钙)。 结果在细胞外钙为1.8mmol/L的静息条件下,应用50μmol/LSAA,各时间点的F/F0和静止状态的F/F0相比无明显变化(n=3,P＞0.05)；在细胞外钙浓度为0的条件下,应用50μmol/LSAA后,各时间点的F/F0和静止状态的F/F0相比无明显变化(n=3,P＞0.05)；应用50μmol/LSAA后可抑制KCl去极化所引起的心肌细胞内钙离子浓度升高的幅度,SAA组虽然可见F/F0值的升高,但升高幅度明显的低于对照组(n=3,P＜0.05)。 结论丹酚酸A可抑制KCl去极化所引起的心肌细胞内钙离子浓度升高的幅度。 综上可知丹酚酸A有对抗心肌细胞缺氧复氧损伤的作用,这可能与它阻断L-型钙通道电流防止钙超载有关。

【学位授予单位】：中国中医科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R285