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《中国食品药品检定研究院》 2015年
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肝素及低分子肝素质量控制相关对照品及标准试剂的研究

王鑫钰  
【摘要】:肝素是广泛应用于心脑血管疾病和血液透析临床治疗的最有效抗凝药物,除具有抗凝作用外,还有许多其他的生物活性及临床用途。低分子肝素是由肝素为原料进一步加工而成的一大类抗血栓药物,临床用途更为广泛,已成为治疗急性静脉血栓和急性惯性冠脉综合症等疾病的首选药物,占抗栓类药物的市场份额不断增大。我国拥有全球最丰富的肝素原料资源,是肝素钠原料药生产和出口的大国。而随着对低分子肝素的深入研究,国内低分子肝素类产品的生产厂家也在不断增加。肝素及低分子肝素的质量直接影响到这两个品种的产业化进程,关系到人民群众的用药安全。控制好肝素及低分子肝素的质量至关重要。2015年版《中国药典》对肝素钠进行了修订,增加了分子量及分子量分布测定项目,并把活性测定方法由凝血法改为生色底物法。而新版国家标准也依据品种的不同对低分子肝素进行了分类提高。细化了分子量与分子量分布、活性测定等项目的限度和操作过程,并增加了鉴别、杂质检查等项目。这些检验项目中需用到的对照品、标准品及标准试剂等目前只能依靠国外进口,实验成本很高,质量难以控制,急需国产化。本文旨在对肝素及低分子肝素重要质量控制项目中使用到的对照品及标准试剂进行研究,通过前期的原料筛选,建立合适的标定方法,制备标定肝素及低分子肝素的国家对照品及标准试剂,用以规范检验部门及生产企业的实验操作,提高国内肝素及低分子肝素的质量,增强国产肝素及低分子肝素在国际市场上的竞争力。本文共分为以下三个部分的内容:第一部分针对分子量及分子量分布检测项目,建立肝素及低分子肝素的分子量测定用对照品的标定方法,对两个品种的分子量测定用待标品进行标定。肝素及低分子肝素的分子量与分子量分布与其抗凝活性有着密切关系。目前常用的分子量测定方法为高效凝胶色谱法,需使用分子量对照品。本文分别溯源到USP肝素分子量对照品与WHO低分子肝素分子量对照品,采用高效凝胶色谱法对这两个品种的分子量待标品进了标定赋值。并使用这两个品种的待标品与国际对照品,对国内主要生产厂家的肝素及低分子肝素样品的分子量及分子量分布进行了测定,结果一致,无显著差异。肝素及低分子肝素分子量待标品可作为分子量测定首批国家对照品使用。第二部分针对活性测定项目中使用的两个生色底物进行标定。2015版《中国药典》中的肝素活性测定项目及新版国家标准中的低分子肝素活性测定项目均收录了抗Ⅹa因子及抗Ⅱa因子效价测定方法。该方法需要使用两个小肽类生色底物,分别为S-2765及S-2238。本文根据底物的性质及用途分别设置了鉴别、杂质检查、含量测定、低分子肝素活性测定等项目,并与进口底物实验结果进行了对比研究。结果表明,待标底物与进口底物结构一致,活性测定结果无显著性差异。待标底物的杂质含量在可控范围内。待标底物可作为活性测定用标准试剂使用。第三部分针对依诺肝素钠的特征结构—非还原端的1,6-脱水衍生物含量测定项目中使用的肝素酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ进行标化。肝素酶对依诺肝素钠的酶解效果对本实验的结果影响较大。本文针对肝素酶的性质、使用特点及用途,分别设置项目对蛋白浓度、分子量、纯度及酶活进行了研究,建立了标化方法并赋值,结果符合要求,标化的三个肝素酶可以作为依诺肝素钠1,6-脱水衍生物含量测定的标准试剂使用。本文对肝素及低分子肝素重要质量控制项目中需要使用的对照品以及标准试剂进行了标准化研究。标定出肝素及低分子肝素分子量测定用首批国家对照品,填补了我国这两个品种的分子量测定用对照品的空白。标定出肝素及低分子肝素活性测定用生色底物标准试剂及依诺肝素钠1,6-脱水衍生物含量测定用肝素酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ标准试剂,改善了依赖进口试剂的现状。本文标定的对照品及标准试剂可用于肝素及低分子肝素的生产质量控制,有助于这两个品种的规范管理,同时也为其他类似品种的对照品标定以及标准试剂的制备标化提供了研究思路和启示。
【学位授予单位】:中国食品药品检定研究院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R927

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