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《北京市结核病胸部肿瘤研究所》 2001年
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结核分支杆菌利福平敏感性分析的研究

黄海荣  
【摘要】: 目的 为了阐明中国结核分支杆菌耐利福平株rpoB基因突变特点,评价DNA序列分析、PCR—SSCP、及微孔噬菌体扩增法(MPRA法)应用于结核分支杆菌利福平敏感性分析的价值。方法 (1)对242株结核分支杆菌临床分离株包括rpoB基因核心区域在内的588个碱基进行序列测定,其中耐利福平株193株,利福平敏感株46株,人工诱导耐利福平株3株。(2)对41株耐利福平结核分支杆菌临床分离株和25株敏感株包括核心区域的rpoB基因片段进行DNA序列分析和PCR-SSCP检测。(3)应用微孔噬菌体扩增法对40株耐利福平结核分支杆菌临床分离株和16株利福平敏感株进行药敏分析。结果(1)DNA序列分析发现:89.1%(172/193)的临床分离耐药株存在rpoB基因突变,而46株敏感株无突变。531位氨基酸突变率为46.1%;526位氨基酸突变率为17.1%;联合突变发生率为12.4%;还有4株细菌发生同义突变;未检测到发生缺失或插入突变的菌株。高耐药组(耐250μg/ml利福平)531位氨基酸的突变率显著高于低耐药组(耐50 μg/ml利福平),P0.05。(2)DNA序列分析和PCR-SSCP法分析同一rpoB基因片段的结果符合率为93.9%(62/66),若把DNA序列分析作为标准,PCR-SSCP法检测rpoB基因突变的敏感度为92.1%(35/38);特异度是96.4%(27/28)。(3)MPRA法与绝对浓度法的符合率为92.9%(52/56),与绝对浓度法相比,MPRA法的敏感度为95.0%(38/40),特异度为87.5%(14/16)。结论 (1)中国结核分支杆菌耐利福平株的rpoB基因突变的发生率约为90%,其中最常见的突变位点是531位丝氨酸和526位组氨酸,两者突变率之和约为63%;利福平高耐药组531位氨基酸发生突变的几率高于低耐药组;受试菌株未发现插入或缺失突变;DNA序列分析对临床用药有指导意义。(2)PCR-SSCP是一种非常有价值的辅助诊断结核分支杆菌耐利福平的方法。(3)MPRA法能较好地分析结核分支杆菌对利福平的药敏情况,方法简便,可作为初步筛选技术,具有良好的推广价值。
【学位授予单位】:北京市结核病胸部肿瘤研究所
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R446.5

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