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《江汉大学》 2017年
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地龙抗凝血活性物质研究

杨新  
【摘要】:目的:地龙(Pheretima)又名蚯蚓,有广地龙和沪地龙两个不同品种:钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspergillum(E.Perrier)的干燥体习称“广地龙”,通俗环毛蚓Pheretima vulgaris Chen、威廉环毛蚓Pheretima guillelmi(Michaelsen)或栉盲环毛蚓Pheretima pectinifera Michaelsen三种动物的干燥体习称“沪地龙”,是我国传统中药之一,据《本草纲目》记载,地龙具有活血化瘀、预防治疗心脑血管疾病等功效,广泛地应用于多种心血管疾病的治疗。近代研究表明,地龙具有促纤溶、抗凝、改善血液循环等作用。本文分别对广地龙、沪地龙中抗凝血活性物质的提取方法进行研究,获得地龙抗凝血活性物质提取工艺,并运用凝胶、阴离子交换色谱法对广地龙最优提取工艺条件下的提取物进行分离及性质研究,为新型地龙抗凝血药物的进一步研究奠定基础。方法:1以宽体金钱蛭为阳性对照、0.9%NaCl溶液做阴性对照,以三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液(Tris-HCl,pH=7.40)做空白对照,应用凝血酶滴定法分别比较两种不同品种地龙——广地龙、沪地龙的水煎煮、0.9%NaCl溶液煎煮、70%乙醇溶液回流提取、石油醚脱脂后水煎煮、石油醚脱脂后0.9%NaCl溶液煎煮及石油醚脱脂后70%乙醇溶液回流提取6种不同提取方法提取物中抗凝血活性物质的差异。2运用凝胶、阴离子交换色谱,构建Sephadex G50、DEAE Cellulose-52、Sephadex G50脱盐及Sephadex LH-20色谱分离体系分离广地龙经石油醚脱脂后0.9%NaCl溶液煎煮提取法的提取物,运用茚三酮反应、双缩脲反应对各流份进行蛋白质或多肽类物质性质鉴定,结合凝血酶滴定法检测各流份抗凝血活性确定最终的抗凝血活性流份。结果:1应用凝血酶滴定法分别比较广、沪两种不同品种地龙,不同提取前处理、不同提取方法提取物中抗凝血活性物质的差异,发现地龙经过石油醚脱脂处理后提取物抗凝血活性明显增强,并且在相同条件下,经过石油醚脱脂处理后,两种地龙干品均是0.9%NaCl溶液煎煮法提取物抗凝血活性最强。2广地龙经石油醚脱脂后0.9%NaCl溶液煎煮提取法的提取物经Sephadex G50分离后得到抗凝血活性流份Ⅰ、Ⅱ,流份Ⅰ、Ⅱ分别经DEAE Cellulose-52分离后得到抗凝血活性流份Ⅱ-2、Ⅱ-3、Ⅱ-4,流份Ⅱ-2、Ⅱ-3、Ⅱ-4分别经Sephadex G50脱盐后得到流份Ⅱ-2-1、Ⅱ-3-1、Ⅱ-4-2,最后流份Ⅱ-2-1、Ⅱ-3-1、Ⅱ-4-2分别经Sephadex LH-20分离后得到最终的抗凝血活性流份Ⅱ-2-1-2、Ⅱ-3-1-1、Ⅱ-4-2-2。分离过程中具有抗凝血活性的流份进行茚三酮反应、双缩脲反应均显示阳性,表明这些有抗凝血活性的流份可能是蛋白质或肽类物质。结论:1不同品种的地龙抗凝活性强度与提取前处理、提取方法有密切联系。广、沪两种不同品种地龙,经不同提取前处理、不同提取方法提取物中抗凝血活性物质存在一定的差异,并发现地龙经过石油醚脱脂处理后提取物抗凝血活性明显增强,可能是因为地龙中部分在水中有溶解的脂溶性杂质可以通过脱脂去掉,单位体积内水能溶解更多抗凝物质,同时脱脂也有助于脱色,去掉了色素干扰,脱脂后的提取液比未脱脂提取液明显清澈,有利于后一步的分离。2广地龙经石油醚脱脂后0.9%NaCl溶液煎煮提取法的提取物经构建的Sephadex G50、DEAE Cellulose-52、Sephadex G50脱盐及Sephadex LH-20色谱分离体系最终得到Ⅱ-2-1-2、Ⅱ-3-1-1、Ⅱ-4-2-2三个具有抗凝血活性的流份,并且茚三酮反应、双缩脲反应均显示阳性,表明这些有抗凝血活性的流份可能是蛋白质或肽类物质,为新型地龙抗凝血药物的进一步研究奠定基础。
【学位授予单位】:江汉大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R284;O652

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