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《江汉大学》 2018年
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响应性功能材料的构建及其在iPSCs的应用

郑志强  
【摘要】:心肌组织工程核心是在体外进行扩增和培养种子细胞,并结合具备可降解、良好生物相容性的三维支架材料,形成细胞-生物材料复合体。原位构建“心肌贴片”是将种子细胞、生物支架和功能性的活性因子植入受损的心肌组织,能够良好的改善心肌功能。干细胞疗法及原位构建“心肌贴片”的是目前心肌组织修复的医学研究热点。干细胞疗法中所基于的的iPSCs可由患者的皮肤组织重编程获取,经过诱导分化可得到大量同源性的心肌细胞,克服了异体ESCs免疫排斥的局限。本文首先对iPSCs向心肌细胞(CMs)的体外诱导分化进行了探究。通过构建可控缓释诱导因子骨形态发生蛋白-4(BMP-4)光转换载片,对缓释BMP-4的可行性及缓释条件下iPSCs向CMs的定向分化进行了探讨。随后,制备了仿贻贝类壳聚糖基酶交联水凝胶心肌支架材料,从凝胶的生物相容性、由iPSCs分化得来的CMs在凝胶表面的粘附性、蛋白表达、自发搏动等方面对凝胶材料进行了综合评价。主要内容如下:1.利用静电层层自组装技术将rhBMP-4自组装在含有包覆二氧化硅的上转换纳米粒子(UCNPs@SiO_2)的光转换载片中。为了实现多层膜的按需释放,引入牺牲层聚(4,5-二甲氧基邻硝基苄基甲基丙烯酸酯-甲基丙烯酸甲酯-r-聚乙二醇甲基丙烯酸甲酯)(PDMP),作为该自组装膜的“牺牲层”。缓释10天后,该自组装膜中rhBMP-4的累积释放率为50.67±0.01%。利用上转换纳米粒子的光转换效应,避免了紫外光对iPSC的直接伤害,并能定时定点缓释rhBMP-4诱导iPSC向CMs的特异性分化,且CMs的特征蛋白表达随着缓释诱导因子的释放量的增加和细胞贴壁培养时间的延长而提高。本研究为后期研究中阐释缓释生物活性因子促进心肌分化的作用机制奠定基础。2.儿茶酚改性的壳聚糖在辣根过氧化物酶(HRP)/H_2O_2作用下,形成生物大分子水凝胶,避免了化学交联剂潜在的副作用。MTT、细胞粘附及FDA染色实验表明酶交联的CS-C水凝胶具有良好的生物相容性。分化成熟的心肌细胞均能在软硬不同的凝胶上保持特征性的蛋白表达并维持跳动,其中,储能模量在110 Pa的软凝胶更有利于心肌细胞的生长和搏动。本研究为酶促交联的壳聚糖可注射水凝胶材料在修复心肌损伤方面的应用提供依据。
【学位授予单位】:江汉大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:TB34;R318.08

【参考文献】
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