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强直性脊柱炎患者HLA-B27的检测、抗原纯化及表达水平的研究(附167例临床分析)

官健  
【摘要】: 目的: 1.分析强直性脊柱炎(AS)患者的临床特点,探讨AS的早期诊断,提 高AS的诊断水平; 2.评价三种HLA-B27检测方法的优劣; 3.探讨HLA-B27的表达(分别从RNA和蛋白水平)与AS发病及其临床 特征的可能联系; 4.分离纯化AS患者HLA-B27抗原,为进一步研究B27提呈肽与AS发 病的关系做技术和方法上的准备。 材料与方法: 1.总结笔者2年来临床实践中确诊的130例AS患者的临床资料和必要 的实验室检查结果,分别比较和分析AS早、中、后期患者、JAS与 AAS、男性与女性AS、HLA-B27(+)与(-)AS的结果。 2.分别使用施桂英提出的JAS诊断条件及ESSG和Amor等关于SpA的 诊断和分类标准重新评价37例AS疑诊患者的诊断。 3.采用PCR-SSP法和单抗板淋巴细胞毒法分别检测138份AS确诊及疑 诊患者的血标本,比较两法的检测结果。 4.应用流式细胞仪合并单克隆抗体技术检测白细胞及T细胞亚群的 HLA-B27抗原的表达水平,比较B27(+)与(-)结果的差异,分析 B27(+)各组间B27蛋白表达的差异及B27表达与AS发病及其临床 特征的关系。 5.应用β-actin内参法RT-PCR技术定量检测B27(+)AS患者白细胞 HLA-B27的mRNA水平,分析各组内差异及mRNA水平与B27蛋白表 达水平、AS发病及其临床特征的关系。 6.应用单克隆抗体亲和层析法分离纯化AS患者外周血单个核细胞表面 的HLA-B27抗原,SDS-PAGE法分析其纯度及分子量。 琴一旱巨大学2000厄协士学笆枪不 结果: 1.130例 AS确诊与 37例疑诊患者约占笔者门诊病人的 5“ 中、后期 占了 AS患者的70%,男女比例为 5.2:1;JAS 37例,AAS 93例,JAS 较 AAS更倾向于男性优势(男女比例达门:l人其外周关节首发率和 受累率均高于AAS,827卜)率亦高于AAS:男性AS以后期患者居 多(近 50们,女性以早期居多u0%以上人 女性 AS平均起病年龄显 著大于男性(p<0.of),男性外周关节首发及受累率和腰椎、胸廊、 颈椎、髓关节强直率均高于女性,B27卜)率男性高于女性;R27h) AS患者脊柱及骸关节强直率远高于 B27(刁者 B27(+)AS中近半 数为后期患者,而 B27卜)组则无一后期患者,B27O)组田R平 均值和ESR异常率均高于B27卜)组。 2.37例肪疑诊患者,平均患病 l.4年,疑诊NS者 15例,2例满足 施桂英诊断条件,8例符合ESSG标准,10例符合Am。r标准:疑诊 AAS者22例,3例符合ESSG标准,7例符合A。or标准。 3.经PCR-SSP法检测138例标本中,B27(。)111例,B27(-)27例, 经单抗板淋巴细胞毒法检测99例B27卜人 29例B27卜人 10例可 疑,与 PCR-SSP法比较其灵敏度为 88.3%,特异度为 85.2%,误诊率 为3.7%,漏诊率为5.4%,总符合率为87 7%。 4.经流式细胞仪结合单克隆抗体技术检测 B27(+)标本白细胞的图形 全部为高荧光区的单一尖峰,与PCR-SSP法的结果完全符合;综合 CD3、CD4、CDS双标图形可的出 7个指标:白细胞 B27荧光值、B27 (+)CD3亚群比例、CD3亚群 B27荧光值、B27(+)CD4亚群比例、 CD4亚群 B27荧光值、B27(+)CDS亚群比例和 CDS亚群 B27荧光值, 经比较,患者组上述7个指标均显著高于正常组(P<0.05);AS确诊 与疑诊患者可诊为 SPA者之间无差异;AAS组白细胞、C*、CIj4亚 群荧光值显著高于NS组(P<0.05),CDS无差异:早期AS组白细胞、 CI)3、CD4及* 荧光值均显著高于中期AS组(P<0.05):女性患者组 白细胞和 T细胞亚群荧光值均显著高于男性组(P<0.05);ESR正常与 异常组、外周受累与单纯中枢受累组、不同首发部位组之间均无显 著性差异:白细胞*细胞各亚群之间均呈显著的正相关叩均m.01人 2 审一旱匣大学2000刁休*学位必丈 H鲫胞、Cm、Cm荧光惭了起病贱朋弓汇相关(卜们.05),!渊啊 与?细胞各亚群荧光值与患病时间早弱负相关叩O.0幻,各细胞荧 光值均与ESR无显著性相关。 5.经p-actin内参法RT-PCI{技术得至1127带相对于p-actjn带的相对 荧光值代表B271RNA 水平,经比较,患者织显著高于正常组 (P<0.001),AS与 SPA、JAS与 AAS组间无显著差异,早朔、后期 组显著高于中州级(P<0、()5),ESR丁常(j异常织、外用受累与单纯 中枢受累组间无显著差异,腰椎起病织显著低于臀、髓、膝、踝起 病组(P<0.05);患者级内,1127-"l{NA水丁山’1绷胞、’1”细胞各亚群 m7荧光值之间均星显著正相关(I丫0.0()I),与起病年龄、患病时间 无显著相关,与以R呈弱十关(1)卅.05)。 6.经单克隆抗体亲和层析法分离纯化的蛋白于SDS十A(;p。显示为单一 条带,其分子量为56.4kD。 结论: l.JAS与*S、男性与女性仰、B27(+)与 B27(-)AS之间有着不同 的临床特点,女性“、827卜)As病情较轻、预后良好;早朔。MS、


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